动态检测活细胞内泛素-蛋白酶体系统活性方法的建立.pdfVIP

第 18卷第 5期 中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志 VoI．18．NO．5 2009年 10月 CHINESEJOURNALOF Y AND Y 0ct．2009 动态检测活细胞内泛素一蛋白酶体系统活性方法的建立 章宏峰 张亦农 汪薇曦 贺 军 李 和 (华中科技大学同济医学院解剖学系组织胚胎学室， 武汉 430030) (摘要 ) 目的 建立一种动态检测活细胞 内泛素一蛋 白酶体系统活性的方法。方法 将表达绿色荧光蛋 白(GFP)或 红色荧光 蛋 白(DsRed，)的质 粒分别 改建为表 达带有 内泛素一蛋 白酶体 系统 降解信号CL1的GFP或DsRed的pGFP或 pDsRed2~质粒，然后转染HEK293细胞，通过G418筛选得到稳定表达GFP或“DsRed2u的细胞系。在蛋 白酶体抑Sd~UN—Acetyl— Leu～Leu—Norleu—al(ALLN)处理GFP或DsRedzu细胞后，应用免疫印记技术检测细胞 内GFP或DsRed：含量的变化，应用荧光 显微镜