蚊虫乙酰胆碱酯酶的真核表达、纯化及活性测定.pdfVIP

第 31卷 第4期 华 中 农 业 大 学 学 报 Vo1．31 No．4 2012年 8月 JournalofHuazhongAgriculturalUniversity Aug．2012，423~427 蚊虫乙酰胆碱酯酶的真核表达、纯化及活性测定 谭 烽 。 兰文升。 崔 峰 乔传令 陈雯莉 1．华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，武汉 430070； 2．中国科学院动物研究所农业虫害鼠害综合治理国家重点实验室，北京 100101 摘要 利用Trizol法从尖音库蚊中提取总RNA，构建 cDNA文库，并克隆出乙酰胆碱酯酶外显子序列；利 用Bac—to-Bac杆状病毒表达系统对蚊虫乙酰胆碱酯酶进行真核表达，并利用 Ni_琼脂糖对酶进行纯化。采用 SDS对纯化产物进行检测，结果表明得到了纯度较高的乙酰胆碱酯酶。参照Ellman法对酶的活性进行 测定，结果显示纯酶的活力为 2．219×10 otol／(min·g)。 关键词 有机磷农药；乙酰胆碱酯酶 ；昆虫杆状病毒表达系统；纯化酶；生物传感