抗牛多杀性巴氏杆菌高免卵黄抗体IgY的制备及间接血凝检测方法的建立.pdfVIP

奶牛 2014·9 保健 DAIRY HEALTH 抗牛多杀性巴氏杆菌高免卵黄抗体IgY的制 备及间接血凝检测方法的建立 高家登，剡根强，王静梅，杨铭伟，王超丽，杨龙龙 （石河子大学动物科技学院，石河子 832000） 中图分类号：S858.23 文献标识码：A 文章编号：1004-4264（2014）09-0026-03 摘 要：本研究通过自制牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌灭活菌苗免疫产蛋鸡，采用卡拉胶结合硫酸铵 沉淀法提取卵黄抗体IgY，并采用间接血凝方法检测抗体效价。结果表明，抗原致敏红细胞的最佳浓度是 800μg/mL，免疫后第7周抗体效价达到高峰，效价为1:1024，高效价持续5周开始下降，测定提取的IgY浓度 为8.258mg/mL，无菌检测及动物安全性实验表明制备的卵黄抗体安全可靠。本研究制备了抗牛多杀性巴氏杆 菌卵黄抗体，为防治由荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌所致的犊牛肺炎提供了新的手段。 关键词：牛多杀性巴氏杆菌；卵黄抗体（IgY）；间接血凝试验 多杀性巴氏杆菌（Pasteurella.multocida,.Pm）是 治疗畜禽的各种疾病，取得了良好效果。本研究以自制 一种常见的病原菌，可引起牛出血性败血症、犊牛肺 的牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌灭活菌苗免疫产蛋 炎、禽霍乱、猪肺疫等多种疾病。由该菌引起的疾病呈散 鸡，从卵黄中提取抗牛多杀性巴氏杆菌抗体，并对其抗 发或地方流行性，主要以高热、肺炎、急性胃肠炎和全身 体进行了初步鉴定，为高免卵黄抗体在犊牛多杀性巴氏 广泛出血为主要特征，给养殖业带来较大经济损失[1]。根 杆菌性肺炎防治中的应用提供了一个新的手段。 据菌体荚膜血清型将多杀性巴氏杆菌分为A型、B型、D 1 材料与方法 型、E型和F型5种[2]。2008年以前我国报道的由多杀性 巴氏杆菌引起的牛出血性败血症是荚膜血清型B型[3]， 1.1  材料 2008年马文戈等人首次从病牛肺脏中分离出荚膜血清 1.1.1. 试验动物. 产蛋鸡由新疆宏新生物科技有限公司 A型多杀性巴氏杆菌[4]。2010年笔者所在实验室从石河 提供；小鼠、家兔由石河子大学实验动物中心提供。 子多个规模化奶牛场因肺炎死亡犊牛的心、肺组织中分 1.1.2. 主要药品试剂. 牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆 离出的多杀性巴氏杆菌均为荚膜血清型A型[5]。该病菌 菌菌种由石河子大学兽医免疫学实验室分离并保存；弗 的血清型多，不同血清型之间多数无交叉免疫性，国内 氏完全佐剂与弗氏不完全佐剂购自北京鼎国昌盛生物有 目前尚无用于犊牛的荚膜血清A型商品疫苗。卵黄抗体 限责任公司；卡拉胶、低甲氧基果胶购自天津市福辰化 （IgY）是鸡被外来抗原刺激后，在卵黄内所产生的特 学试剂厂。 异性抗体。目前国内外学者报道，利用卵黄抗体预防和 1.1.3. 主要仪器设备. GR22E日立高速冷冻离心机； NANODROP2000.Speetrophotomet核酸蛋白分析仪； 2014-02-10 收稿日期 ： FLUKO.F6/10超细匀浆机。 国家科技计划支撑课题（2012BAD43B02），奶牛规模化养 基金项目 ： 殖主要疾病综合防控技术集成与示范。 1.2  方法 高家登（1988-），男，河南人，硕士研究生，研究方向为 作者简介 ： 兽医技术服务。 1.2.1. 间接血凝抗原的制备 剡根强（1958-），男，甘肃人，博导，教授，从事动物传 通讯作者 ： 将牛巴氏杆菌菌种在含有10%犊牛血清的脑心浸液 染病诊断与防治研究工作。 培养基（BHI）中增菌培养过夜，然后用0.4%的甲醛灭 26