制备型高效液相色谱分离过程的放大研究（Ｉ）填料尺寸.pdfVIP

维普资讯 制备型高效液相色谱分离过程的放大研究 ‘ (工)填料尺寸 王志祥 张志炳 (中国药科大学化工教研室 ，南京210o09) (南京大学化工学院，南京 210093) 何志敏 条国琮 (天津大学化学工程研究所，天津 300072) 摘要 利用制备型高效液相色谱(HLc)分离装置 ．对牛血清白蛋 白(BAs)和牛血清红蛋 白(I-IC)进行 了制备分离 ．考 察了填料尺寸对柱效和分离度的影响。结果表明．在制备分离过程 中，对于难分离物系，可以采用鞍小直径的色谱填 料 ．“提高分离效率 。但在分离度可以满足分离要求的前提下，使用较大直径的色谱填科将更为有利 。 关键词 制备型 高效液相色谱 填料粒径 柱效 分离度 利用天然资源提取蛋 白质药物或对基 因工程产 白质 的排阻色谱进行了优化研究，结果表 明在排阻色 物进行分离纯化 ，已成为一个 十分活跃的研 究领域。 谱中，为了提高分离度，应使用小颗粒填料。从 目前 某些重要的蛋 白质药物或基因工程 产品(如干扰素 的研究现状来看 ，有关制备型HPLC中的色谱填料尺 等)因提取困难 ，价格十分昂贵 ，因此 ，研究和开发各 寸优化问题还没有很好地解决。本文利用 自行设计 类活性生物大分子的分离纯化技术 ，已成为当务之 的制备型 HPLC分离装置 ，对 BAS和 HG的制备分离 急。从分离科学的现有水平来看 ，液相色谱 ，尤其是 过程进行 r实验研究 ，着重考察 了填料尺寸对柱效和 80年代在分析型 HPLC基础上兴起 的制备型 HPLC， 分离度的影响。 在大规模分离纯化生物活性物质特别是蛋 白质方面 已显示出巨大的应用潜力，因而受到了许多研究者的 Ⅱ 塞堕塑坌 高度重视。 1．1 实验材料 在HPLC中，填料尺寸直接影响柱效、负荷能力 BAS(pI49，Mr=6700，中科院生物所试 剂厂)； 及压降。在分析型 HPLC中，研究者已广泛研究过填 HG(pI6．90．Mr=l5500．上海东方 生化试剂 公 司)； 料尺寸对分离效率的影响。但在柱超载情况下 ，对填 NDG一4型柱填料 (d=43564．8、864、1l17171，平 料尺寸进行优化研究却少有报道。Eiserlbeib等_l对 均孔径9700nm，天津化学试剂二厂)；流动相为pH值 不同填料尺寸的制备型 HPLC过程进行 了优化 ，认为 =5．9的缓冲溶液 (由02mol／L)磷酸氢二铺一磷酸 在柱超载情况下 ，使用大尺寸的填料并适 当加大柱 二氢钠组成)；蛋白质溶液分别由缓冲溶液配制而成 ， 长，可使分离效果基本不下降。Engelhardt等 对蛋 对于2种蛋白质混合物，每种蛋白质的浓度均相等 。 。 国家教委优秀青年教师基金资助项 目 一 28 一 维普资讯 科技进展{AdvancesinScience＆Technology) 2001正第1期_雹EⅢ 12 装置流程和方法 本文所建 的制备 HP[(：分离装置流程如图 1 所示。进样阀上连有定量管，改变其体积可改变样品 E 的进样体积。根据不同的制备量和分离要求，该装置 毒 可使用不同内径及不 同柱长 的制备柱 实验在 型