大豆异黄酮改善衰老小鼠肾脏抗氧化作用的研究.pdfVIP

第26卷第1期 徐州师范大学学报(自然科学版) V01．26．No．1 2008年3月 J．ofXuzhouNormalUniv．(NaturalScienceEdition) Mar．．2008 大豆异黄酮改善衰老小鼠肾脏抗氧化作用的研究 钱 进，毛 缜，杨 敏，常 晴，郑元林’ (徐州师范大学生命科学学院；江苏省药用植物生物技术重点实验室，江苏徐州221116) 摘要：昆明系小鼠随机分成衰老对照组(皮下注射D半乳糖)、生理盐水对照组、大豆异黄酮大剂量组、大豆异黄酮 水平，探讨大豆异黄酮对D半乳糖致衰老小鼠肾脏抗氧化水平的调节作用以及相应的机制．结果显示大豆异黄酮可减 平，且大豆异黄酮大剂量组和小剂量组在bcl一2的转录水平上表现出一定的剂量效应．表明大豆异黄酮能清除肾脏内过 多的氧自由基，进而抑制过氧化反应后的细胞凋亡损伤，对衰老小鼠的肾脏具有一定的保护作用． 关键词：大豆异黄酮；D半乳糖；抗氧化作用；细胞凋亡 中图分类号：Q956 文献标识码：A 文章编号：1007—6573(2008)01—0052一04 大豆异黄酮(daidzein，Da)是一种广泛存在于豆科植物中的异黄酮类化合物，它具有植物雌激素 样作用，可以阻止低密度脂蛋白修饰，降低其氧化而起调节作用[1]．近年来大豆异黄酮以其广泛的生物 学活性，如促生长、增强机体免疫、抗氧化、抗癌、防治心血管疾病等作用，日益受到关注[2“]． 氧化酶，组成了体内抗氧化防御系统的重要部分．这些酶活性的高低决定了机体的抗氧化水平．研究发 现，衰老过程中这些抗氧化酶活性的降低是造成氧化损伤的原因之一[5]．当自由基代谢发生紊乱时，导 致自由基过剩、活性氧增多，引起脂质过氧化，并降解为MDA．目前，MDA已经成为判断体内脂质过氧 化反应程度的特征指标哺]，可以反映组织氧化的程度． 肾脏是人体重要器官之一，同时也是毒物直接作用的靶器官之一，许多免疫及非免疫性的实验研究 已证实氧自由基在急慢性肾脏损伤中的重要作用，它作为一种致病介质参与急性肾炎、新月体肾炎及各 种原因导致的急性肾功能衰竭的发病过程口]．肾脏的老化和功能的丧失直接影响人类的肌体健康。本实 验研究了大豆异黄酮对D半乳糖致衰老小鼠肾脏抗氧化水平的调节作用，并探索其相应的作用机制． 1材料和方法 实验动物分组及处理 昆明系健康小鼠40只，体重20～25g，由徐州医学院实验动物中心提供．将 小鼠随机分为4组：正常对照组、衰老对照组、大豆异黄酮大剂量组、大豆异黄酮小剂量组，每组10只． 衰老对照组及实验组皮下注射D半乳糖(200mg·kgq·d_1)建立衰老模型，正常对照组皮下注射相同 剂量生理盐水．第7周开始实验组同时灌胃大豆异黄酮(大豆异黄酮大剂量组、大豆异黄酮小剂量组灌 胃剂量分别为10和5 组灌服等量的1％吐温一80水溶剂．在连续给药6周后，开始进行实验． 药品与试剂 大豆异黄酮由南京农业大学农业部动物生理生化重点实验室陈杰教授提供；D半乳 试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品；原位杂交所用的bcl一2寡核苷酸探针及相应试剂由武汉博 士德生物工程有限公司提供． 收稿日期：2008—0卜29 作者简介：钱进(1982一)，男，江苏姜堰人，助理实验师．主要从事生物化学的研究． ·通讯作者，E-mail：ylzheng@nnu．edu．∞ 万方数据 第1期 钱进，等：大豆异黄酮改善衰老小鼠肾脏抗氧化作用的研究 53 卡公司生产)；图像采集分析分别使用的是大恒图像采集系统和上海微图仪器科技发展有限公司出品的 WT—Mivnt生物图像分析软件． 肾脏匀浆上清液的制备参照南京建成生物工程研究所的肾脏组织匀浆制备方法，将小鼠拉断颈 椎处死后，迅速取出肾脏，在冰冷的生理盐水中洗净，用不锈钢剪刀剪碎，取9倍组织重量的预冷生理盐 000 水，匀浆制成10％的肾脏组织悬液，离心(4 r／min，15min，4℃)，取肾脏组织匀浆上清液，立即进 行抗氧化酶和脂质过氧化水平测定． 冰冻切片的制备小鼠乙醚麻醉后，心脏灌流生理盐水，至肾脏变白为止．取肾脏，固定，取出肾脏 cm×1 进行