扩展青霉碱性脂肪酶cDNA的克隆和表达.pdf

第 期 邬敏辰等 扩展青霉碱性脂肪酶 的克隆和表达 5 : cDNA 509 文章编号:0427 7104(2001D05 0509 07 扩展青霉碱性脂肪酶CDNA 的克隆和表达 1 2 2 1 1 邬敏辰 李江华 黄伟达 孙崇荣 (1. 复旦大学 生命科学学院 上海 200433; 2. 江南大学 医学系 江苏 无锡 214063D 摘 要 采用 试剂一步法所抽提的总 的 值为 甲醛变性电泳呈现真核微生 : (260D/ (280D 1. 82 TRIzol RNA D D 物所特有的 和 条带 根据扩展青霉所产碱性脂肪酶 末端 个氨基酸残基序 28S rRNA 18S rRNA . (Lip PE ND 20 列和真核生物 端具有 等所提供的生物信息 采用 技术和 法扩增了 3/ ( D 3/ mRNA poly A RT PCR RACE Lip PE 成熟肽编码区和 非编码区的 直接将该 产物克隆至 载体中 序列分析表明 该碱性脂肪 3/ cDNA PCR pUCm T . 酶含有 个氨基酸 其中保守的五肽序列为 进一步采用 公司的 TM 258 . Gly ~is Ser Leu Gly ClonTech SMART 文库构建试剂盒 扩增 克隆和测定了自转录起始点至编码区的 片段 从而完成了 完 PCR cDNA ~ cDNA Lip EP 整 的分析测定 最后将编码完整脂肪酶蛋白的 克隆至 表达载体中 在大肠杆菌 . 5 3 21 cDNA cDNA pGEX X BL 中进行 诱导表达 检测结果表明 所表达的 融合蛋白分子质量约为 免疫