抗结核DC疫苗的初步研究.pdf

第26 卷 第6 期 武汉大学学报 （医学版） VoI. 26 No. 6 2005 年ll 月 MedicaI JournaI of Wuhan University Nov ，2005 抗结核DC 疫苗的初步研究 l l l 2 魏雅稚 刘胜武 夏 飞 肖 凌 l 武汉大学医学院免疫系 武汉 43007 l 2 湖北中医学院 武汉 430064 摘要 目的：研制抗结核的新型疫苗（DC 疫苗）。方法：无菌分离C57BL/ 6 小鼠骨髓细胞，以rGM-CSF 及rIL-4 诱导分化获得树突状细胞（DC ），以pEG~sp65 融合质粒转染DC ，共聚焦激光扫描显微镜检测转染率，继以电镜鉴 定细胞形态、流式细胞术分析组合性表面分子表达、混合淋巴细胞反应（MLR ）检测体外刺激T 细胞增殖的功能。 将制备的DC 疫苗静脉接种正常同系小鼠，分别取各脏器冰冻切片后荧光显微镜观察；取小鼠静脉血用ELISA 法检 测IL-l2 及IFN-! 的表达量。结果：24 h DC 转染率约20% ，电镜可见细胞呈典型毛刺状突起，流式细胞分析表明转 染后的DC 表面M~C 、33Dl 的表达量均呈显著增高。MLR 显示，pEG~sp65 转染DC 组与pEGFP-Cl 转染DC 组 及空白DC 组比较呈统计学增高。脏器冰冻切片显示，接种pEG~sp65 转染DC 小鼠组及pEGFP-Cl 转染DC 小鼠 组与未转染DC 组比较，在各脏器分布中，以脾脏分布显著增高。其余脏器分布无显著差别。pEG~sp65 转染DC 小鼠组IL-l2 及IFN-! 表达量显著高于pEGFP-Cl 转染DC 小鼠组及未转染DC 小鼠组，P 0 . 05 ，未转染DC 组与 阴性对照组相比，IL-l2 及IFN-! 表达量也有统计学增高，P 0 . 05 。结论：pEG~sp65 制备的DC 疫苗具有成熟表型 及功能，能够刺激小鼠IFN-! 及IL-l2 分泌增高。 关键词 树突状细胞；疫苗；结核杆菌；融合质粒 中图分类号 R378. 9l + l 文献标识码 A 文章编号 l67 l-8852（2005 ）06-0747-05 Initial Research of Dendritic Cell Vaccine Against Tuberculosis Wei Yazhi ，Liu Shengwu ，Xia Fei ，et al Medical School of Wuhan Uniuersity ，Wuhan 430071 ，China Abstract Objective ：To deveIop noveI vaccine （DC vaccine ）against tubercuIosis. Methods ：Separate mar- row of the C57BL/ 6 mice in asepsis was done ，foIIowed by suspend the tissues in medium to induce den- dritic ceIIs （DCs ）suppIemented with rGM-CSF and rIL-4 ，transfect DCs with constructed pEG~sp65 ， with rates detected by the Iase