抗诺氟沙星噬菌体单链抗体库的构建与筛选.pdfVIP

动物医学进展，2010，31(S)：36—41 in Medicine ProgressVeterinary 抗诺氟沙星噬茵体单链抗体库的构建与筛选 郑志明1,2，金社胜1，肖希龙2，候晓林¨ (1．商务部流通产业促进中心，北京100070；1．中国农业大学动物医学院兽医药理学系，北京100193,I 3．北京农学院动物科技系，北京102206) VH-Linker-VL片段，酶切(∥I-4-Not 富集法，经三轮淘筛，间接Elisa初步检测重组scFv的特异性抗原结合活性。成功构建噬茵体单链抗体库， 步建立药残检测新技术奠定了基础。 关键词：诺氟沙星；噬茵体展示技术；单链抗体 中图分类号：s859．7 文献标识码：A 诺氟沙星(Norfloxacin，NFLX)是第三代喹诺 1材料与方法 酮类抗生素。NFLX抗菌谱广，对革兰阳性菌和阴 1．1 实验动物 性菌都有较强的抗菌作用，近年来在多种病原菌感 雄性Balb／e小鼠，6周龄，约20g／只，由军事医 染的治疗中大量使用。动物性产品中和环境中的 学科学院实验动物中心提供。 NFLX残留会导致致病菌耐药性产生[I]和其他危 1．2主要试剂 害。从1997年8月20日起，美国禁止将氟喹诺酮 牛血清白蛋白(BSA)、N一羟基琥珀酰亚胺 类药物作为非限制性药物使用。研究诺氟沙星残留 的检测方法显得尤为重要。目前常见有高效液相色 谱法(HPLC)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等比]， 公司产品。诺氟沙星购自中国药品生物制品检定 由于ELISA方法具有简便、快速、灵敏、价廉等优 点，成为目前用于兽药残留分析的常用方法之一。 公司。 高效率、低成本制备特异性强的单克隆抗体，已经成 Prime- Fidelity RNA提取试剂RNAiso、High 为免疫学工作者努力探索的目标之一。噬菌体展示 DNA script、pyrobest 抗体技术，是继传统杂交瘤细胞融合法制备单克隆 盒、胶纯化试剂盒及DNA 抗体的又一种新技术，通过将抗体重链、轻链可变区 产品，限制性内切酶NotI、sfiI为NEB公司产 的基因克隆，在噬菌体表面展示具有特异性的重组 品，T4DNA连接酶为Promega公司产品。 抗体。本研究运用噬菌体展示技术，构建抗诺氟沙 星噬菌体单链抗体库，为进一步获得抗诺氟沙星单 链抗体奠定了基础，也为实现诺氟沙星残留免疫学 学动物医学院沈建中教授惠赠。 检测方法提供了新的途径。 Yeast 收稿日期：2010—03—27 基金项目：国家高技术研究发展计划资助项目(2007AA062404) 作者简介：郑志明(1981一)．中国农业大学博士研究生，研究方向为兽医药理学。*