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中药材中细菌群体感应效应剂的筛选和研究 Screening of bacterial quorum sensing effector from Chinese traditional medicinal materials （申请工学硕士学位） 学 科：生物化工 研究方向：生物活性物质的研究 班 级：B0508093 学 号：1050809102 研 究 生：周秀清 导 师：彭华松 副教授 上海交通大学生命科学技术学院 2008 年 1 月 中药材中细菌群体感应效应剂的筛选和研究 摘要 群体感应(quorum sensing，QS)是细菌根据细胞密度变化进行基 因表达调控的一种生理行为。随着细胞密度增加，细菌产生的信号分 子浓度逐渐增加，当信号分子积累到一定浓度时会启动相关基因的表 达，如共生、细菌毒性、竞争、接合、抗生素的产生、运动性、孢子 及生物膜的形成等。筛选各种 QS 效应剂可以调节和控制细菌的各种 行为，因此具有非常重要的生物学意义和实际应用价值。 本研究利用对 AHLs 敏感的指示菌 C. violaceum CV026 的显色反 应，尝试从中国传统的中药材中筛选天然的 QS 效应剂。研究中首先 确立了 AHLs 信号分子的提取途径和固体平板检测方法，然后探讨了 液体培养基中半定量检测信号分子的影响因素，发现以乙醇溶解紫色 素的方法优于水饱和丁醇法萃取紫色素，乙醇的最适使用浓度为 55.6%，最适检测波长为 580nm 。 从多种中药材中筛选 QS 效应剂的研究表明，与单独添加信号分 子相比，连翘等八种中药和信号分子一起添加时 C. violaceum CV026 的紫色减弱，其中可能含有细菌群体感应抑制剂；而三种药材鱼腥草、 金银花、柴胡和信号分子一起添加 C. violaceum CV026 分泌紫色增 强，其中可能含有 AHLs 功能的类似物。然后进一步确定了三种中药 材中的增色作用物质是药材自身所含有，而非外源污染所致。鱼腥草 可能含有与信号分子协同使 C. violaceum CV026 显色增强的物质，而 非 AHLs 功能类似物；柴胡和金银花单独均可使 C. violaceum CV026 显色，表明该物质中含有信号分子的功能类似物，且柴胡中的活性物 质含量远远大于金银花。 此外，研究中还初步探讨了柴胡中细菌群体感应效应剂的提取方 法，发现以水作为提取剂，浸泡 3d 获得的 AHLs 类似物最多。将柴 胡的浸提液以正己烷去除非极性物质后，用乙酸乙酯反萃取，可得到 较高纯度的 AHLs 类似物。进一步的研究表明，该物质的水溶液呈酸 性（pH1 ），对碱性环境非常敏感，但是在高温条件下比较稳定。 关键词：群体感应，C. violaceum CV026，柴胡，信号分子，效应剂 Screening of quorum sensing effector from Chinese traditional medicinal materials Abstract Quorum sensing (QS) is a community genetic regulation mechanism that controls microbiological functions according to the cell density. Bacteria with QS can produce and release a kind of signal molecule called autoinducer,