猪带绦虫组织蛋白酶B基因的克隆表达及抗血清的制备.pdfVIP

ofAnhui 安徽农业科学，Journal Agn．Sci．2015，43(16)：132—135 责任编辑陈玉敏责任校对况玲玲 猪带绦虫组织蛋白酶B基因的克隆表达及抗血清的制备 予J、铭苑，方怀盛，才学鹏+ (中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，甘肃兰州730046) 摘要 [目的]探索猪带绦虫组织蛋白酶B基因克隆、原核表达及抗血清制备的方法。[方法]根据从GeneDB获得的猪带绦虫组织蛋 白酶B的基因序列设计特异性引物，以猪带绦虫的cDNA为模板，扩增出猪带绦虫组织蛋白酶B基因的开放阅读框。将去掉信号肽的 部分进行了原核表达，用重组蛋白免疫青紫蓝灰兔，并制备高效价抗血清。[结果]成功克隆了猪带绦虫组织蛋白酶B基因的开放阅读 074 ku，具有组织蛋白酶B的特征结构域。采 框序列，将其命名为TscpB，长度为1bp，编码357个氨基酸，理论蛋白分子质量约为39．71 用大肠杆菌原核表达系统对目的蛋白进行大量表达，成功获得了大小约38ku的猪带绦虫组织蛋白酶B的重组蛋白，此目的蛋白以包涵 体的形式存在。Westernblotting表明，猪囊尾蚴病阳性血清可以与纯化的重组蛋白发生特异性结合，说明被猪囊尾蚴感染过的猪血清中 存在组织蛋白酶B的抗体。I结论]猪带绦虫组织蛋白酶B重组质粒能在大肠杆菌系统中高效表达，且该蛋白具有较高的免疫活性。 关键词猪带绦虫；组织蛋白酶B；序列分析；原核表达；抗血清 中图分类号S858．28文献标识码A 文章编号0517—66ll(2015)16—132—04 and of BfromTaen／asofiumand ofItsAntiserum CloningExpressionCathepsin Preparation SUN of Re— Mmg·yuan，FANGHuai-sheng，CAIXue-peIlg+(StateLaboratoryVeterinaryEtiologicalBiology，LanzhouVeterinary Key searchInstituteofChinese of AgriculturalSciences，Lanzhou．Gansu730046) Aeademy Absract Theresearchaimedto themethodsofthe and of BfromTaeniasoliumand 0bjective explore cloningexpressioncathepsin prepara． tionofitsantiserum．1Methodr111e were tothe of Bfromrsoliumobtainedfrom designed sequence specificprimers according cathepsin cDNAofZsoliumasthe ORFof BfromZsoliumwas was GeneDB．Taking templates．thecathepsin amplified．Theprokaryoticexpression witllthe madeafter wasremovedfrom0RFof B．Chinchillarabbitswereimmunizedrecombinantto signa