噬菌体展示技术筛选人隐孢子虫P23抗原表位.pdfVIP

中国人兽共 患病学报 2O13，29 (1) ChineseJourna1ofZoonoses 47 DOI：10．3969／cjz．j．issn．1002—2694．2013．01．010 噬菌体展示技术筛选人隐孢子虫P23抗原表位 徐前明 ，李 国清 摘 要 ：目的 本研究利用噬菌体展示技术筛选人隐孢子虫 P23抗原表位 ，为研制其抗原表位疫苗奠定基础。方法 首 先用人隐孢子虫重组 P23抗原免疫动物以制备抗体 ，将该抗体与噬菌体展示随机肽库结合 ，通过 ELISA和 Western—blot方法 鉴定阳性克隆，并对阳性克隆进行增殖 ，然后对其序列测定和抗原表位预测。结果 噬菌体肽库结合抗体后 ，经 ELISA方法 可鉴定 1o株为阳性克隆，Western-blot检测可发现有 67kD 目的条带出现 ；序列分析结果可发现它们 中具有 3个不 同结构表 位序列 ，命名为epl，ep2，ep3，且预测 出具有 良好的亲水性。结论 所得序列是具有 B细胞抗原表位 。 关键词 ：噬菌体展示技术 ；筛选 ；人隐孢子虫；P23抗原；细胞表位 中图分类号：R382．3 文献标识码 ：A 文章编号：1002—2694(2013)01—0047—04 Cellepitopescreeningon P23antigenofCryptosporidium hominis byphagedisplay technique XU Qian—ming～ ．LIGuo—qing (1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，AgriculturalUniversity，Hefei230036，China； 2．CollegeofVeterinaryMedicine，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China) ABSTRACT：Inthisstudy，phagedisplaypeptidetechnologywasappliedtoscreencellepitopewithanti—P23一IgG inorder todevelopitsepitopevaccine．TherecombinantP23antigenwasappliedtoimmuneanimaltoobtainantibody (Ab)，thenthe Abwashybridizedwithphagedisplaypeptidelibrary，andthepositivecloneswereidentifiedbyindirectELISA andWestern- blot．Afterproliferating，thepositiveclonesweresequenced．Finally，antigenindex，hydrophilicityandsecondarystructure wereanalyzedbybio—informatics，and epitopesequenceswerededucted．Theresultsindicatedthat10 positivephageclones wereidentifiedbyELISA ，and67kD proteinscouldbefoundbyWestern—blot．Theanalysisofsequenceshowedthatthreedif— ferentsequencescouldbefound，namedepl，ep2andep3，respectively．Andthethreepeptidesallhadhydrophilicityindiffer— entdegrees．ItisconcludedthatthesepeptidescanbeconsideredasB cellepitope． KEY WORDS：phagedisplaypeptidetechnology；screening；C．hominis；P23antigen；cellepitope SupportedbytheNat