噬菌体展示肽库技术淘选蚕丝纤维蛋白连结短肽的实验研究.pdfVIP

第39卷第 1期 西南民族大学学报 ·自然科学版 。 JournalofSouthwestUniversityforNationalitiesN·aturalScienceEdition doi：10．3969~issn1003-427120130105 噬菌体展示肽库技术淘选蚕丝纤维蛋 白连结短肽 的实验研究 戴静，李涵依，全亚玲，欧小兵，陈艺元，郝葆青 (西南民族大学生命科学与技术学院，成都 610041) 摘 要：采用噬茵体随机肽库展示技术研究与蚕丝纤维蛋 白连结的功能性短肽的淘选方法．实验结果显示，淘选的与蚕 丝纤维蛋白连结的功能性短肽都包含有一个相同的氨基酸残基序列 QSWS．噬茵体与蚕丝蛋白的连结试验和合成肽与 蚕丝蛋白的连结试验都证实了QSWS序列与蚕丝蛋白连结的重要性．随着对淘选方法进一步改进和优化，这些功能性 短肽将有助于对蚕丝进行功能化改造，可拓宽蚕丝在生物材料领域中的应用． 关键词：噬菌体展示肽库技术；短肽；蚕丝蛋白；肽库；蚕丝 中图分类号：R3l8．08 文献标识码：A 文章编号：1003-4271(2013)01．0017-04 1 引言 蚕丝是由蚕丝蛋白和丝胶蛋白组成，是最古老、最常用的生物材料之一，如已使用许多世纪的医用缝合线等． 蚕丝不仅具有 良好的生物相容性和生物降解性，而且容易加工成各种形态，如纤维，纱线，织物，海绵状和薄膜 等J【J．目前，蚕丝生物材料在现代生物医学中的应用正在加速的发展，比如组织工程的基质材料等 J．为了拓宽 蚕丝的应用领域，还需对蚕丝分子功能及其特性进行较为详细的研究．早期对蚕丝材料分子功能和化学特性的 研究大都仅涉及到各种反应试剂与蚕丝蛋白的共价化学修饰方面j【J．2000年Mori等 报道了有关蚕丝蛋白的基 因修饰方面的研究．然而，这些基因修饰作用仍受限于宿主蚕遗传基因编码蛋白以及一些对宿主蚕无害基因编 码蛋 白的影响． 近些年，各种生物分子技术如短肽标记技术的应用受到广泛关注．比如，短肽能以非共价键结合方式与一 些可反映蚕丝新特性的功能性亚基(例如蛋 白质，有机分子或纳米粒子)融合．因而，可利用噬茵体肽库的亲和性 淘选将这些与外壳蛋 白融合的随机短肽展示或标记出来，这是一种有效发现各种功能性短肽配基的策略pJ． Sarikaya等 认为许多短肽配基对无机或有机材料各种分子以及各种生物分子都具有亲和性．本文研究了噬菌 体展示随机肽库技术淘选蚕丝纤维蛋白连结短肽的方法，并对所淘选的几个短肽配体进行了克隆、测序、合成、 比较和分析． 2 材料与方法 2．1 蚕丝脱胶 家养蚕茧由蚕农(成都，新津)提供．脱胶方法选用标准的脂肪酸盐／苏打法 ，即将蚕茧放入到含有 0．08％ (w／v)Na2CO3andO．2％ (w／v)马赛皂液(橄榄油皂液)中进行脱胶，98~C，轻柔搅动 1h．脱胶后纤维蛋白用温蒸馏 水漂洗 lOmin，然后在温和的条件(O．06％Na2CO3和 0．15％马赛皂)下重复进行上述脱胶过程两次．最后，将脱 胶后的纤维蛋白用温蒸馏水反复冲洗 10rain，用冷水漂洗，在室温下用吸水纸上吸除多余水分，备用． 收稿 日期：20l2．12．17 通讯作者：郝葆青(1956-)，男，教授，博士．E-mail：baoqhao~jgmail．corn． 资助项 目：西南民族大学研究生 “创新型科研项 目” 18 西南民族大学学报 ·自然科学版 第39卷 2．2 蚕丝蛋白结合噬菌体的淘选与鉴定 选购M13噬菌体随机 12肽库(NewEnglandBiolabs产品，100ul，1．5×10pfu／ml，复杂度 ～2．7×10个转化子， 贮存于含 50％甘油的 TBS溶液中)用于肽的筛选，即噬菌体随机 l2库肽与次要外壳蛋白Pill融合的展示． E．coliER2738宿主菌N(ewEnglandBiolabs产品)用于噬菌体的扩增和鉴别． 将干燥脱胶的蚕丝纤维蛋I~(10mg)放入到旋转过滤柱中，加入500gl0-1％TBST(50mmolTris／HClpH7．5， 150mmolNaC1，0．1％V／VTween-20)