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“酶工程”复习 成绩构成： 作业及态度（10%），实验（20%），1 次考试（70%） 题型： 一、填空题（24格，每格1分，共24分） 二、选择题（20题，每题1分，共20分） 三、简答题（6题，每题5分，共30分） 四、综合应用题（2题，每题8分，共16分） 五、论述题（10分） 课程要点 1、酶的催化作用特点 2、酶工程定义 3、酶工程的应用范围 4、酶工程的组成 5、酶工程的主要任务 6、酶工程研究简史 库尼(Kuhne) 、巴克纳兄弟(Buchner) 、米彻利斯(Michaelis)、曼吞(Menten)、萨姆纳(Sumner)、 Koshland、Monod、雅各(Jacob)、莫诺德(Monod) 7、酶的分类 8、酶的作用机制 9、酶的催化能力 10、酶的专一性 11、酶活的可调节性 12、酶活力单位 13、酶的生产方法 14、酶生物合成的基本过程 15、酶生物合成的调节 16、酶的生产菌种要求 17、常用产酶微生物 18、酶的合成类型 19、提高酶产量的措施 20、酶分离纯化 酶的提纯过程记录（步骤总体积（ml）酶浓度(u/ml)比活力（u/mg）总活力（u）产率（%） 21、酶固定化（定义、优点、缺点、方法、性质、评价等） 22、酶的化学修饰的目的和意义 23、酶化学修饰的机理 24、化学修饰的方式 25、酶反应器的类型 26、酶反应器的类型 27、酶反应器的选择 28、酶反应器的操作要点 29、酶反应器的微生物污染 30、维持酶的稳定化的作用力 31、蛋白质的稳定化措施 32、模拟酶产生原因 33、模拟酶的分类 34、酶与抗体的区别 35、抗体酶的制备 36、酶在非水相催化的意义 37、非水相中酶学性质 38、非水介质酶存在状态 举例： 1、根据米氏方程，当[S] Km时，反应速度与底物浓度无关，呈零级反应特征；当[S]Km时，反应速度与底物浓度成正比，反应呈一级反应;当[S]= Km时，v= Vmax/2。 2、下列（ ）酶属于EC1. 。 A、酯酶 B、水化酶 C、羟化酶 D、水解酶 3、简述终止酶反应的几种方法？（4种以上） 答：①反应时间一到，立即取出适量的反应液，置于沸水浴中，加热使酶失活； ②立即加入适宜的酶变性剂，如三氯醋酸等，使酶变性失活； ③加入酸或碱溶液，使反应液的pH值迅速远寓酶催化反应的最适pH，从而终止反应； ④将取出的反应液立即置于冰粒堆中，或冰盐溶液中，使反应液的温度迅速降低至10℃以下等等。 4、设计“L-谷氨酸脱羧酶的固定化”的固定化过程？ 答：固定化方法：包埋法 ； 基本原理：在酶本身不发生化学反应的情况下，将其包埋进半透性的多聚物内。水分、小分子底物和产物可以自由出入，而酶蛋白却不会漏出。 步骤1：酶与载体溶液混合； 解说：按1：20的比例将酶液加到50mL 2.5%海藻酸钠溶液中混合均匀。 步骤2：固定造粒； 解说：用玻璃注射器将含酶混合液用20G针头滴入5%CaCl2中制成共固定化凝胶颗粒。固化4h后用水冲洗备用。颗粒直径为4-5mm。 步骤3：固定化酶活力测定； 解说：称取固定化L-谷氨酸脱羧酶颗粒10g，置于三角瓶中，加水12ml和pH4.6醋酸缓冲液6ml，37℃下恒温15min，再加入40mmol/l谷氨酸标准溶液2ml，37℃下恒温振荡反应30min。反应前后分别取样经适当稀释后，用茚三酮显色法测定L-谷氨酸含量。 5、试论述现代酶反应工程多以固定化酶为催化剂依据？ 答：1、溶液酶存在的缺陷。 （1分） 2、固定化酶及其特点。 （2分） 3、酶固定化原理及其方法。（3分） 4、固定化酶性质。 （3分） 5、结论。 （1分） * * 课程目标： 1、巩固酶学基本知识； 2、了解酶生产方法； 3、熟悉酶改性技术 4、掌握酶应用领域； 4、知晓酶工程研究进展； 5、学会基本的酶应用技能。 *