人肝脏胶原样凝集素1在肝癌细胞株HepG2内的定位及其功能探讨.pdf

山东医药2012年第52卷第42期 ·基础研究· 人肝脏胶原样凝集素1在肝癌细胞株 HepG2内的定位及其功能探讨 明亮1，王万海1，李付广2，张世杰1，任春峰1，尹慧卿1 (1郑州大学第一附属医院，郑州450052；2郑州大学基础医学院) 摘要：目的观察人肝脏胶原样凝集素l(CL—L1)在肝癌细胞株I-IepG2内的定位及其功能。方法利用 观察cL—Ll在HepG2细胞内的定位及HepG2细胞的克隆形成能力。结果cL—L1主要定位于HepG2细胞的细胞 质基质中，高尔基体、内质网和细胞核中不存在cL—L1。cL—L1基因过表达可引起HepG2细胞克隆形成能力的明显 下降。结论CL—L1定位于HepG2细胞的细胞质基质，可能是肝癌相关抑癌基因。 关键词：人肝脏胶原样凝集素l；肝肿瘤；肝癌；HepG2细胞株；克隆形成 中图分类号：R392 文献标志码：A 文章编号：1002—266X(2012)42-0027-02 人肝脏胶原样凝集素l(CL—L1)是胶原样凝集箱中培养20h。配置转染液：1号液(2l,zg的pcD- 素家族的新成员之一Ll’21。机体内胶原样凝集素的 主要功能是通过识别外来病原体表面上病原相关分 子模式，参与区分“自己”和“非己”糖结构，从而在 fectamine 抗病原体感染和宿主防御中发挥重要作用。3o。目 250 IxL)，将配好的1、2号液混合，即为转染液，室温 前已发现的胶原样凝集素中多数为分泌蛋白，存在 静置30 min。培养的HepG2细胞去上清，用无血清 于体液和分泌液中，只有CL—L1为可溶性胞质内蛋和无抗生素的DMEM培养液洗2次，加入1mL无 白4J。因此，推测cL—Ll可能具有其独特的功能，血清和无抗生素的DMEM培养液后逐滴加入转染 但目前对其功能的了解甚少。为此，2011年11月1 液，边加边摇动¨J。细胞培养6h后，去除转染液， 日一2012年5月31日，我们观察了CL—L1在肝癌 换成DMEM完全培养液继续培养42h。 细胞株HepG2的定位，并通过pcDNA3．1／myc—his—1．2．3 CL—L1和pEGFP—N1载体将CL．L1基因转染HepG2 h，收集细胞 胞转染pcDNA3．1／myc-his—CL—L1后48 细胞，观察其克隆形成能力，探讨CL．L1的功能。 蛋白(以转染空载质粒的细胞作对照)，BCA法进行 1材料与方法 1．1材料肝癌细胞株HepG2，pEGFP—N1载体， 电泳并转印至PVDF膜，用Westernblot法进行检测 大肠杆菌DH5ct。DMEM培养液和胎牛血清，工具 分析。 酶，其他试剂及材料见文献旧J。 1．2．4 1．2方法 染pcDNA3．1／myc-his—CL—L1后24h，消化全部细 1．2．1 载体pcDNA3．1／myc—his—CL—L1和pEGFP— 胞，转移到细胞培养皿中再继续培养24h，加G418 N1一CL—L1的构建采用已构建好的含有人全长 至终浓度800mg／L，每3～4d换液1次，直至长出 CL．L1 cDNA的真核表达载体pcDNA3．1／myc-his— 肉眼可见的克隆，吸去培