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人骨唾液蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达.pdf
ISSN1007.7626 中国生物化学与分子生物学报 2004年6月
CN1 1-3870/Q Molecular 20(3):325~329
ChineseJoumalof and Biolo霉Ⅳ
Biochemistry
人骨唾液蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
王 董 燕+。, 张宏斌, 武 婕, 郑文岭
(广,111军区广州总医院医学实验中心,广州510010)
摘要 利用RT—PCR技术,从人骨膜组织总RNA中扩增长度为1kb的人骨唾液蛋白(bone
II,进行双链核苷酸序列测定.构建人BSP毕
sialoprotein,BSP)基因编码区序列,克隆至pBluescript
赤酵母表达质粒pPICZaA—hBSP并导入毕赤酵母Pichiapastoris
测rhBSP的分泌表达.采用镍离子亲合层析纯化rhBSP并检测生物学活性.结果表明,克隆片段与
基因库所登录的序列相一致,分泌表达的rhBSP.His融合蛋白分子量约为67kD,占培养上清总蛋白
的80%,浓度约为0.248
g/L,rhBSP蛋白具有抑制羟基磷灰石晶体生长的活性.
关键词 骨,唾液糖蛋白,分泌表达,毕赤酵母
中图分类号Q812
and ofHumanBone
CloningExpression
inPichia GSl15
Sialoproteinpastoris
WANG
Jie。,DONGYan一,ZHANG Jie,ZHENG
Hong.bin,WU Wen.1ing
(CenterofMedicalResearch,General 510010,China)
HospitalofGuangzhouMilitaryCommand,Guangzhou
kb
Abstract0Be DNA forhumanbone was with
fragmentencoding sialoprotein(BSP)cDNAamplified
human totalRNAas andclonedto II.ne
nucleotide was
periosteum template pBlueseript sequenceanalysis
vector wasconstructed.1inearizedandintrodueedtoPichia
performed.r111eexpressionpPICZaA—h粥Pgene
GSl15 of was
rhBSPdetectedSDS.PAGEandWestem
pastoris byelectroporation.Theexpression by blotting.
was
TherhBSP Ni“一
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