嗜水气单胞菌BA-ELISA的建立及其在病原检测中的应用.pdf

第27卷第1期 华中农业大学学报 V01．27No．1 of Feb．2008．80～85 2008年2月 JoumalHuazhongAgriculturalUniversity 嗜水气单胞茵BA-EL|SA的建立及其 在病原检测中的应用· 胡大雁1’2’ 钱 冬2’ 刘 问2’ 张友平2’ 潘清清1’2’ 陈昌福D一 (”华中农业大学水产学院，武汉430070；∞浙江省淡水水产研究所，湖州313001) 摘要从中华鳖中分离的嗜水气单胞菌致病株T0608经福尔马林灭活后，注射免疫新西兰兔，制备了高价 免疫血清，血清的菌体凝集效价可达1／l280；G蛋白亲和层析纯化兔IgG，将IgG用生物素标记，建立了生物素一 cfu，相当于o．5ng菌体蛋白，其检 亲和素双抗体夹心酶联免疫吸附法(BA_ELISA)；其最低检出限为2．5×103 测灵敏度为ABC-EI。ISA(4．o×104cfu)和间接EI。ISA(4．o×104cfu)的16倍；特异性试验结果表明，本法与鱼 类气单胞菌、拟态弧菌、海豚链球菌、大肠杆菌等无交叉反应。BA—ELISA可不经细菌培养直接检测人工感染 48 h中华鳖的肝、肠道组织中的嗜水气单胞菌。用该方法对湖州市龟鳖养殖场的水样、中华鳖和巴西龟肝、肠道 内容物进行检测．结果表明该方法可较好地应用于发病中华鳖的病原早期诊断及养殖中华鳖的病原检测。 关键词生物素一亲和素双抗体夹心酶联免疫吸附法；中华鳖；嗜水气单胞菌；检测 947．1+2 中图法分类号S 文献标识码A 文章编号1000一2421(2008)01一0080—06 嗜水气单胞菌(A叭僦啪s^州r0加如)属气单胞 1材料与方法 菌科(Aeromomdaceae)气单胞菌属(A明伽D撇s)[1]，广 泛存在于河流、湖泊、池塘等水环境中，是多种水产 1．1菌株及试验动物 动物的主要致病菌，也可引起畜禽感染，同时是重要 嗜水气单胞菌T0608株分离自浙江省杭州市 的人类致病菌[2|。20世纪90年代以来在我国各地某甲鱼养殖场，发病甲鱼症状为底板发白、脖子肿 暴发的主要淡水养殖鱼类细菌性败血症(暴发性败 大、咽喉腮状组织的群毛突起充血糜烂、肝脏肿大、 血症)即由致病性嗜水气单胞菌引起[3]。随着中华胃肠粘膜充血，分离菌株对中华鳖的致死剂量为 2．7×107 鳖集约化养殖规模的发展，由气单胞菌引起的中华 cfu／只；嗜水气单胞菌(APro优。砣口s^y— mi行if甜s) 鳖疾病也日益成为中华鳖养殖的主要病害，其中以 dro础i肠)BSK一10、拟态弧菌(Ⅵ6，．io i以缸F)S02、 嗜水气单胞菌引起的中华鳖病害较为常见[4‘5]。已SsN0608、海豚链球菌(S￡阳p￡o∞ff“5 经报道的25种中华鳖疾病中，由嗜水气单胞菌引起 的鳖病达15种之多，严重阻碍了中华鳖养殖业的健所保存菌株；新西兰兔(约2kg)购自浙江省医学科 康发展‘6|。 学院实验动物中心；攻毒用中华鳖购自浙江省湖州 生物素一亲和素酶联免疫吸附试验(BA—市中心农贸市场，体重为(150±20)g。 1．2试剂和仪器 ELISA)是采用生物素标记抗体与酶标记亲和素结 合的一种酶联免疫测定法，具有快速、灵敏和特异等 优点。临床上，BA—EI．ISA法用于检