土壤宏基因组文库的构建及格尔德霉素类PKS基因的初步筛选.pdfVIP

426 中国抗生素杂志2011年6月第36卷第6期 文章编号：1001-8689(2011)06-0426-05 土壤宏基因组文库的构建及格尔德霉素类PKS基因的初步筛选 林灵l’2陈菲菲2，3王以光2赫卫清1∥2王相晶1，+ (1东北农业大学，哈尔滨150030；2中国医学科学院／北京协和医学院，医药生物技术研究所，y_tt部抗生素 生物工程重点实验室，北京100050；3中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所，成都610052) 摘要：目的 构建土壤宏基因组文库并对格尔德霉素类I型聚酮合酶(polyketidesynthase，PKS)基因进行初步筛选研究。方 法 直接提取土壤样品中宏基因组DNA，以Fosmid为载体，构建宏基因组文库。根据格尔德霉素的I型PKS基因的保守序列设计 引物，使用菌落PCR方法直接筛选所获得的宏基因组文库。结果成功构建了土壤宏基因组文库，获得约6800个克隆子，其平 均插入片段在25kb以上，覆盖至少170Mb的基因组信息。通过PKS基因筛选，获得了新的PKS基因片段。结论本文报道了土 壤宏基因组文库的成功构建，并为利用宏基因组技术寻找新的聚酮类次级代谢产物的生物合成基因，以便于其异源表达或组合 生物合成新的聚酮类次级代谢产物奠定基础。 关键词：宏基因组文库；PKS；土壤 中图分类号：Q933文献标识码：A Constructionofasoil and of metagenomiclibrarypreliminaryscreening geldanamycin-liketype—Ipolyketidesynthasegene Lin and Lin91，一，ChenFei-fei2，一，WangYi—guan92，HeWei-Qin92WangXiang-jin91 Northeast of of of (1 University,Harbin150030；2Laboratory Agricultural Key BiotechnologyofAntibiotics，MinistryHealth；Institute Medicinal ChinaNationalPharmaceutical 100050；3 Industrial Biotechnology,CAMSPUMC，Beijing GroupCorporation，Sichuan Institute ofAntibiotics，Chengdu610052) Abstract Constructionofasoil and of Objective metagenomic librarypreliminaryscreeninggeldanamycin- like A wasconstructed the type—Ipolyketidesynthasegenes．Methodsmetagenomiclibrary byinserting