甜菊糖甙的测定方法.pdfVIP

2009正 中 国 糖 料 第 1期 SugarCropsofChina 65 匿 文章编号：1007—2624(2009)01—0065—03 甜菊糖甙的测定方法 于聪敏，石 岩 (青 岛农业大学旱作技术山东省重点实验室，青岛266109) 摘 要 ：对 目前甜菊糖甙测定方法进行 了综述 ，并 比较 了容量法、重量法、流动注射化学发光法、分光光度法、毛细管 电泳法、高效液相色谱法、薄层色谱法之间的差异性和优缺点。目前应用最广泛的测定方法是高效液相色谱法。 关键词 ：甜叶菊 ：甜菊糖甙 ；测定方法 中图分类号 ：$566．9 文献标识码 ：A 甜菊糖甙是一种具有甜味的萜烯类配糖体，分子式为 C，H印0，分子量为 803，其纯度在 90％12~)z为 白色 粉末 ，纯度在80％ 90％之间为微黄色粉末 。目前 。从甜叶菊 中分离出来的甜菊糖甙共有 8种 l【1．其中占最主要 的是 Stevioside成分 [121，约占总量的60％ 70％，甜度约为蔗糖的300倍，余味长而微苦如青草。其次是 RebaudiosideA，约 15％～20％，甜度为蔗糖的450倍 ，甜味最接近蔗糖 。其他组分含量都较少。甜菊糖甙在人 体 内不参与代谢，不产生热量，作为一种非糖、非营养型的甜味剂，不仅符合现代健康饮食的要求，还具有清 热、利尿 、调节 胃酸的功效 ，为糖尿病 、肥胖症 、高血压 、心脏病等患者提供了不诱发病情 的甜味代糖 品。因此 近年来在食品和医学中得到广泛应用 。甜菊糖有着广阔的发展前景 ，但 目前准确而又简单易行检测方法尚未 建立 ，现阶段用于分析甜菊糖甙含量的方法主要有容量法 、重量法 、流动注射化学发光法、分光光度法 、毛细 管电泳法、高效液相色谱法、薄层色谱法，现将这些方法的基本情况综述如下。 1 测定方法 1．1 高效液相色谱法 高效液相色谱法是以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。高效液相色谱 对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制 。因而弥补了气相色谱法的不足 在 目前已知的 有机化合物 中，可用气相色谱分析的约 占20％，而 80％则需用高效液相色谱来分析。国标 8270—1999中规定 高效液相色谱仪的条件选择为 ： 色谱柱 ：一NH：基柱 ；流动相 ：乙腈：水=80：20；流 速 ：1．2mldmin；检 测 ：紫外检测器 、波长 210nm； 进样量 ：151xL。TomasVanekI]等采用反相色谱法对甜叶菊糖进行了分离，彭启华4[1采用了反相高效液相 法测定甜菊糖甙的含量在 43．80％～60．39％ 刘超 5[1等用高效液相测得甜叶菊糖 中的Stevioside和 RebaudiosideA的回收率分别是 98．61％、97．40％；检出限分别是0．3ng／L、4．7ng／L。其所用色谱仪条件选择如 下 (品种未提)： 色谱柱 ：KromasilNH2柱(250mmx4．6mm，5m)；流动相：V(L腈)：V(水)=75：25；柱温：30cC；流速 ：0．6mL／min； 进样量 ：201xL：DAD检测 ：210～400nm。 吴岩6[1等用 DNA检测器对粗甜菊糖 中甜菊苷进行测量 ，其线性范 围50～3000ixg，平均 回收率为 99．5％， 其含量的平均值为 0．358％ 1．2 薄层色谱法 薄层色谱(thinlayerchromatography)常用TLC表示，又称薄层层析，属于固一液吸附色谱。是近年来发展起 来的一种微量 、快速而简单 的色谱法，它兼备 了柱色谱和纸色谱的优点。一方面适用于小量样品(几到几十微 克 ，甚至 0．01g)的分离 ；另一方面若在制作薄层板时，把吸附层加厚 ，将样 品点成一条线 ，则可分离多达 500mg的样 品 王圣刚[7】等用薄层层析法对甜叶菊种子中是否存在甜菊糖甙进行了研究 ．结果发现甜叶菊种 子中含有甜菊糖甙 陈慕英 等利用氯仿：甲醇：水(35：20：1)将甜菊提取液在硅胶 C板上展开，然后洗脱，蒽酮一硫酸显色 。最 后在 620nm处测出了甜菊甙单体含量。施荣福[91等以氯仿：甲醇：水(30：20：