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中国试剂网 3.9.212 生化分离技术－－柱层析分离 常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作 固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写 些心得，希望 能有所帮助。 柱子可以分为：加压，常压，减压。 压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板 数。所 以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如 天然化合物的分 离，一个柱子几个月也是有的。 减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空 气通过 硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解 的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。 以前曾经大量的过 减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后， 就几乎再也没动过减压的念头了。 加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。 压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵 （给鱼缸供气的就行）。特别是 在容易分解的样品的分离中适用。压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分 离效果。个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。 关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。 柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小 （反映在柱子 上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米， 而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲 了。而如果样品层只有0.5 厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然 采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也 许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。 现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40 倍， 中国试剂网 3.9.212 具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开 （是指在所需组分rf 在0.2～0.4，杂质相差0.1 以上），就可以少用硅胶，用小柱子 （例如200 毫克的 样品，用2cm×20cm 的柱子 ）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以 增加柱子的直径，比如用3cm 的，也可以减小淋洗剂的极性等等。 关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的产品。 可以湿柱，也可以干柱。不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶 剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产品分解，毕竟要分离的是敏感的东东，小 心不为过。也是因为分离的东西比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循 schlenk 操作。至于是加压、常压、减压，随需而定。因为是schlenk 操作，所以 点板是个问题，如果样品是显色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就 行了。如果样品无色，只好准备几十个schlenk 瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之 后就知道样品在哪，也就可以省些了。像我以前过一根无水无氧柱，需要六个 schlenk，现在只一个就能把所要的全收集到。 无水无氧柱中用的比较多的是用 氧化铝作固定相。因为硅胶中有大量的羟基裸露在外， 很容易是样品分解，特 别是金属有机化合物和含磷化合物。而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的，选 择余地比较大，但是比硅胶要贵些。 听说有个方法，就是用石英做柱子，然后用HF254 做固定相，这样在柱子外面 用紫外灯一照就知道产品在哪里了，没有验证过。哪位做过可以提出来大家参详 参详。 -- ※ 关于湿法、干法上样。 湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越 少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。很多样品在上柱前是粘乎乎的