脊髓缺血%2f再灌注损伤上调蛋白α-tubulin、NF-M与NF-L鉴定和功能分析.pdfVIP

关键词脊髓损伤、皮层感觉诱发电位、大鼠 图一正常大鼠双下肢csEP 图二损伤后14天大鼠下肢csEP 鉴定与功能分析 王海涛 杨小玉 吉林大学中日联谊医院 目的通过对脊髓胞损伤过程中上调活跃的神经修复相关蛋白进一步研究验证 其变化特点及作用机制，从而为寻找脊髓z傻损伤特异性诊断／治疗新靶点奠定 坚实基础。 方法本文以急性脊髓勰损伤兔模型为研究对象，并以其损伤节段腰髓为研究 标本，应用差异蛋白质组学双向电泳(姗)分析比较假手术对照组与再灌注 0、12、24、48h时间点脊髓蛋白表达变化，成功获得各个时间点的差异蛋白， 整合应用免疫组化(Jm朋Ⅳ以础如纫cJI明l妇幻，j髓配)和免疫印迹(胍五嗍 6zD蛳臃)分析方法对其中筛选出特异上调2倍以上的神经类蛋白质及其可能 存在磷酸化修饰蛋白进行鉴定及功能分析。 结果本论文应用腰3、4、5动脉阻断法(改良鼽印月法)成功建立了急性兔脊 髓轻度节段性胞损伤动物模型。应用蛋白质组学双向电泳分析方法对假手术对 照组与再灌注0、12、24、48h组损伤脊髓标本研究，结合质谱分析筛选获得差 异表达2倍以上的蛋白21个，其中上调模式蛋白3个，分别为：口．加6“砌、ⅣBM 与ⅣB￡蛋白。整合脚和唧分析方法对3种上调模式蛋白进行了验证分析， 42S／4两 在各损伤时间点脊髓组织中a珈6掰砌、?、7：BM和M■￡，蛋白分别定位于神经元细 胞膜、轴突及细胞浆中；其中在脊髓灰质、白质及前后角分布中，脊髓灰质较白 质表达量增加(P锄盼)；脊髓前角和后角区域表达量未见明显差异(P统酊)。 发现三种蛋白表达量随脊髓再灌注时限的延长具有依从性递增，而在脊髓再灌注 2铀达到峰值，后逐渐回归至脊髓再灌注初始水平，前期实验我们发现?、理一-M、 Ⅳ，-￡可能发生了磷酸化修钸，其磷酸化蛋白与未磷酸化M吧M、M■￡，蛋白表达 量变化呈平行关系。 结论口．fH锄砌、MeM和ML￡蛋白对损伤脊髓神经元具有保护和修复作用， 其作用机制可能是通过修复神经元细胞膜、促进轴突再生途径参与脊髓上傻损伤 的保护，MeM和M见￡蛋白对胞损伤脊髓保护作用我们推测可能是通过其蛋 白磷酸化修饰来实现。 关键词Q．微管蛋白；神经丝蛋白；缺血／再灌注；蛋白质组学；免疫组化；免 疫印迹 Abs订act Identi6cationandFunction of Q—tubuUn AnalysisUp-regulated NF—MandNF—LProteinson Acute Ischemia，Reperfusion of Cord IlljurySpinal Haitao Wang，XiaoyuY^ang The charact嘶sticsandmechallismof objectiVe：changing actionoftheactive nen，e—like haVe beenValidated tlle如nherstudies up—regulated proteins through the cord will asolid tofind lay foundationa duringspinalZ儡岫u吼which specific oranew扫eatmentofme cord