抗生素AGPM的摇瓶发酵条件的正交实验优化.pdfVIP

抗生素AGPM的摇瓶发酵条件的正交实验优化 石炳*刘喜朋赵红胡宗定元英进 (天津大学生化工程系300072) 摘要： 论文考褰了培养基组成对新型抗生素AGPM发酵的影响．采用正交实验设计方法优化了培 养基的组成．单位发酵液的活性较优化前提高了20倍． 关键词：抗生素培养基链霉茵正交实验设计 微生物是自然界最丰富的天然药物资源之一．开发微生物的代谢产物以得到新的抗癌、抗 菌等天然药物或先导药物具有重要价值。本实验室获得一株新的链霉菌变种(Streptornycessp)． 其代谢产物对多种革兰氏阳性菌具有明显的抑制作用，具有良好的应用开发前景。研究发现，培 养基的组成、配比等营养条件对活性成分的生成具有较大影响，本文考察了碳氮源对其活性的影 响并采用正交实验对培养基进行了优化。 l材料与方法 1．1菌种 链霉菌变种(Streptomycessp)：土壤分离。 枯草芽孢杆菌(Bacillussubti如)：天津轻工业学院提供。 1．2培养基细菌培养基川：牛肉膏蛋白胨固体培养基。 K，HPO。0．5，NaCl0．5，自来水1000ml，pH6．0。12l’C灭菌15min． 设计，自来水1000ml，pH5．5。121’C灭菌15min． 1．3培养方法： 液体种子培养：将活化好的斜面孢子转接于液体培养基，装液量50mI／250ml三角瓶，28- C．180rpm摇瓶培养48h． 发酵培养：将上述培养种子液以10％的接种量接种于发酵培养基，装液量50ml／250ml三角 瓶，28’C。180rpm摇瓶发酵培养96h。 1．4活性测定方法(杯碟法f2】)： ml冷却至50‘C左右 将37‘C培养48小时的枯草芽孢杆菌(浓度107CFU／m1)0．5ml与12 的细菌培养基混合到八己灭菌直径10cm的平扳．待凝固后，放置牛津杯，取一定量过滤发酵液 置于牛津杯中，37。C培养24小时，量取抑菌透明圈直径，即可表示相应活性，或与序列稀释所 得标准曲线对照．从而得相应绝对活性。 2结果与讨论 2．1碳源对发酵活性的影响 碳源常通过直接影响微生物的碳代谢、呼吸、能量、生长及相关代谢而影响抗生素等次生代 谢产物的合成与分泌。实验考察了葡萄糖、可溶性淀粉、玉米淀粉等对发酵液活性的影响。 表1碳源对抗生素AGPM合成的影响 碳源 浓度(g／L) 相对活性(％) 葡萄糖40 61．8 可溶性淀粉40 i00．0 玉米淀粉 40 58．8 玉米淀粉+o．059淀粉酶 40 98．I 氮源为：玉米浆2ml，蛋白胨49·其它同1．2a 表I表明，可溶性淀粉较葡萄糖和玉米淀粉有利于产物的生成，而玉米淀粉加淀粉酶，其效 果与可溶性淀粉相当。这说明一定程度降解的淀粉糊精对活性成分的生成是有利的。 2．2氮源对发酵活性的影响 尿素、硫酸铵、玉米浆、黄豆饼粉等是常用的工业微生物发酵氮源，实验对相同氮含量的不 同氮源进行了对比研究。 表2氮源对抗生素AGPM合成的影响 氮源 浓度(g，L) 相对活性(％) 蛋白胨 6 100 玉米浆 30 58．6 黄豆饼粉 24 82．0 尿素 6 30．2 硫酸铵