LyGDI在肿瘤细胞辐射凋亡敏感性中作用和P53调控研究.pdf

LyGDI在肿瘤细胞辐射凋亡敏感性中的作用与P53调控研究 中文摘要 LyGDI在肿瘤细胞辐射凋亡敏感性中的作用 与P53调控研究 中文摘要 制；研究恢复细胞P53蛋白表达对细胞辐射诱导凋亡及LyGDI的影响。 方法： 91yGDI真核表达载体。经酶切、PCR、测序验证 pEGFP-DF．1yGDI及pEGFP．DF—ANl 其正确性；脂质体法转染真核细胞MCF-7后免疫印迹检测融合蛋白的表达，免疫组 化观察融合蛋白在细胞内定位； p53转染L929细胞，建立稳定转染细胞株， 2．脂质体法以pcDNA3．1．wt RT-PCR、免疫印迹法验证；生长曲线法检测细胞增殖能力的的变化；X射线照射 后，克隆法检测放射敏感性的变化；流式细胞术检测细胞凋亡率的改变，免疫印迹 法检测相关蛋白的表达； 测转染lyGDI对辐射诱导两种细胞凋亡率的影响，探究其对细胞放射敏感性的影响， 免疫印迹法检测相关蛋白的表达。 结果：测序证明基因序列完全正确，免疫印迹和免疫荧光染色检测到目的蛋白 表达；恢复细胞P53蛋白的表达抑制了L929细胞的增殖能力，促进辐射诱导的细胞 亡率上升，辐射处理后观察到融合蛋白断裂成相对应的LyGDI及ANl9LyGDI蛋白； 稳定转染lyGDI的A549细胞辐射诱导的凋亡率上升，增加细胞放射敏感性，在该细 胞受到8Gy 蛋白。 结论： LyGDI在肿瘤细胞辐射凋亡敏感性中的作用与P53调控研究 中文摘要 91yGDI 真核表达载体； 2．恢复L929细胞的P53表达抑制细胞增殖能力，增加细胞放射敏感性并发现 P53外源性表达可以诱导LyGDI断裂； 性： 关键词：真核表达载体；辐射敏感性；细胞凋亡；P53；LyGDI； 作 者：董玉金 指导教师：周新文 11 LyGDI在肿瘤细胞辐射凋亡敏感性中的作用与P53调控研究 英文摘要 011theroleof in of sensitivity Study LyGDIapoptosis cancercellinducedradiationand ofP53 by regulation ● Abstract construct vectorof andANl with Objective：To eukaryoticexpressinglyGDI 91yGDl andTo andANl fluorescenceestablishstablecelllinestransfectedwith tag lyGDI 91yGDI orderto effectsandmechan