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pcDNA3(．)SVT重组质粒的构建及其
在小鼠小肠上皮细胞中的表达
研究生：韩庆广
导师：赵国琦教授
(扬州大学动物科学与技术学院，225009)
摘要
cells，IEC)
小肠是营养物质吸收的主要场所，小肠上皮细胞(Intestinal
epithelial
是肠道主要的功能细胞，参与肠道食糜的消化、吸收、免疫屏障和应激反应等，
并与肠道的内、外分泌功能宵密切关系。原代培养小肠上皮细胞费时费力，传代
次数有限，在体外长期培养条件下，细胞牛理功能容易变异，造成试验结果囚细
胞代数4-1舌]而难以比较。建立永生化小肠上皮细胞系，可以为研究肠道微生态营
养和小肠一I：皮细胞的增殖分化提供重要的研究：[具。本文旨在利用SV40T能促进
细胞水qi化的功能，构建含有SV40T基冈的真核表达载体，将重组克隆转染小鼠
小肠上皮细胞，进行小鼠小肠上皮细胞的永生化研究，为永生化小鼠小肠上皮细
胞系的建立提供参考依据。
筛选出插入方向正确的连接产物，并将其送生物公司测序。
探索小鼠小肠上皮细胞的分离纯化方法，得到纯度较高的小鼠小肠上皮细胞。
以胎鼠小肠为材料，通过组织块培养法进行原代小鼠小肠上皮细胞的体外培养，
行消化传代，通过形态学观察和免疫组织化学进行鉴定。
T基因导入小鼠小肠上皮细胞，进行永生化研究。采用脂质体转染法，
将SV40
将编码SV40
T基
因在小鼠小肠上皮细胞中成功表达。
T抗原进行
结果表明：真核表达载体pcDNA3(．)SVT构建成功，为利用SV40
真核细胞永生化研究提供了稳定、可靠的分子工具。通过组织块培养法得到的小
鼠小肠上皮细胞乍K状况良好，增殖旺盛，经过纯化，得剑了纯度较高的小鼠小
肠上皮细胞，免疫升【织化学鉴定为阳性。为小鼠小肠i：皮细胞的永生化研究提供
条带，表明SV40T毖凶在小鼠小肠上皮细胞中成功表达，为永生化小鼠小肠上皮
细胞系的建立奠定’J，基础。
关键词：小鼠；猿猴病毒40大T抗原；IEC(d、肠上皮细胞)；永生化
of Plasmid
ConstructionRecombinant
andIts inIntestinal CellsofMouse
Expression Epithelial
M．S．Candidate：Han
Qing—guang
Advisor：Prof．Zhao
Guo·qi
Scienceand
(CollegeofAnimal Tec。hnolo母,Yangzhou
Abstract
Smallintestineisthemain for and ofnutrients．Intestinal
absorption epithelial
organdigestion
in tract．Besides in
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