力竭运动大鼠心肌功能损伤的分子机制.pdfVIP

力竭运动大鼠心肌功能损伤的分子机制 夏岩石柳宏野 哈尔滨医科大学 摘要：长期系统训练可引起运动员心脏形态、结构产生适应性变化。长期耐力运动训练，运动员其心肌泵 血功能、心肌有氧能力及储备能力增强，是亡棚对运动训练产生良好适应的表现。然而过度运动可导致大鼠 左室形态结构、血流动力学及心肌力学指标发生显著性变化，心脏舒、缩功能降低，表明过度运动有损心脏 功能。但是其确切机制尚未被证实。本实验通过建立大鼠运动至力竭模型，检测心脏功能学指标，采用分子 生物学和免疫荧光方法检测心肌细胞钙通道的变化，揭示力竭运动大鼠心脏功能损伤可能的机制。 关键词：心肌运动员大鼠 目的：通过检测实验性大鼠力竭运动后心肌细胞膜匕L-型钙通道Carl．2(Q1C)亚型的表达，阐述力竭 运动大鼠心肌功能损伤的分子机制。方法：Wistar大鼠30只分组，建立实验性大鼠力竭运动模型，分别是 lC)在正常、跑台运 学指标；Trizol法提耽心肌总烈A，利用RT-PCR技术和免疫荧光技术测定Cavl．2(Q 1C)mP,NA和蛋白表达显著增强(尺0．05)；与正 值降低(尺0．05)；RT-PCR和免疫荧光结果显示Cavl．2(Q W-,DI朋功能学指标和Cavl．2(a1C)无明显改 常组懒台运动组MAP、LVSP、LvEDP、+dp／dtm、-dp／dm 变，无显著性差异。结论：力竭运动后的大鼠心肌收缩和舒张功能降低，其初制与蝴胞膜匕卜型钙通道 的数量变化有一定联系。 1．材料黜 1．1实验动物雄性wistar大鼠30只，200-250克由哈尔滨医科大学大庆校区实验动物中心提供。 1．2试剂与药物戊巴比妥钠购自E海化学试剂采购供应站，Cavl．2(Q1C)单克隆抗体购自SantaCruz公 fluor anti 司，荧光标记的二抗Alexa goat mouse594购自MolecularProbes公司，封闭羊血清，购自中 杉公司，BSA，购自上海华舜生物工程有限公司，多聚甲醛购白天津市科密欧化学试剂开发中心，TritonX—100 RT-P僳试剂盒从Invi trogen试剂公司和宝生物工程(大连)有限公司购买。 海天能科技有限公司)，荧光显微镜(日本OlyⅢpus公司)，水平摇床(肋嘎05B)北京拇仪器厂。 1．4实验分组对大鼠首先以lOm／min进行约20rain的适应性训练，持续2周，使其熟悉跑台运动方式。选 取能够适应跑台的大鼠进行随机分组。正常组(不采取任何措施)；跑台运动组(跑台运动不出现力竭现象)； 力竭运动组(持续运动，直至驱赶无效)，每组10只鼠。 1．5大鼠力竭运动模型的建立以20re／rain持续运动，直至驱赶无效，个别大鼠出现身体伤害，停止运动。 运动24h后1％戊巴比妥钠(4ml·kg。)腹腔注射麻醉后取材。 1．6心功能检测正常组、跑台运动组、力竭运动组分别在力竭运动24h后记录心率(职)、平均动脉压(MAP)、 张最大压力变化速率(-dp／dtm)。 1．7 RT-PCR技术 1．7．1 X RNA提取1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，取下D脏，左心室剪成0．5mmO．5ram大小的组织块，液氮 冻存，～80℃保存组织块：—步提取法，提耽心室肌总烈A。各总烈A样本山／如。的比值为1．8～2．0。 (ⅡIC)引物，由上海申能博彩生物科技有限公司合成。引物序列如下：Cavl．2(QlC)上游引物： 1．7．3RT--PCR反应以总RNA为模板，94℃3min预热，94℃30s，52．5C30s，72℃30s连续反应30 个循环，分别扩增出Cavl．2(a 度(丰度值)—致，再按B-actin的加样量加Cavl．2(Q1C)的PCR产物，1．5％的琼脂锫凝胶电泳， 以BIO-RID多媒体凝胶成像系统照相，并进行半定量分析。 445 1．8免疫荧光技术 1．8．1组织包埋切片模型制备成功后，每组取5只鼠1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(4ml／kg)，取心脏用多