shRNA阻断Ⅰ型PI3K信号传导通路对人胃癌SGC7901细胞影响.pdfVIP

shRNA阻断I型P13K信号传导通路对人胃癌SGc7901细胞的影响 中文摘要 细胞的影响 中文摘要 构质粒，观察其对靶基因P13KCAmRNA表达的抑制效果，并筛选出干扰效果最佳的 shRNA序列。 方法：选择针对人I型P13K信号传导通路基因P13KCAmRNA的特异性RNA 采用基因测序确保干扰序列已正确插入载体中；将质粒转染胃中分化腺癌SGC7901 细胞，通过shRNA结构阻断I型P13K信号传导通路，诱导细胞发生自噬性死亡。在 h、48h、72 转染第24 h镜下观察胃癌细胞形态学变化，转染48h后收集细胞总RNA， mRNA 采用实时荧光定量PCR技术检测目的基因P13KCA、自噬相关基因MAP．LC3 h后收集细胞总蛋白，采用WesternBlot技术检测P13KCA蛋 的表达变化；在转染72 白催化亚基p110蛋白的表达变化；通过上述检测结果，筛选出效果最佳的shRNA干 扰序列。 结果：成功构建4种具有I型P13K信号传导通路靶向干扰的重组质粒，基因测 h h后细胞出现明显皱缩，部分细 后镜下观察见细胞出现胞体皱缩、细胞间隙增宽，48 胞脱落，72h后见较多细胞脱落；48h后行荧光实时定量PCR技术检测各组P13KCA 以及MAP．LC3 mRNA均表达下调，其中干扰质粒样品No．705的P13KCAlmRNA表达量下调至空 mRNA表达量下调至空白对照组的O．4％ 白对照组的2．4％±1．3％(p0．05)，P13KCA2 mRNA均表达 ±0．4％(p0．05)，4组行shRNA干扰细胞的自噬相关基因MAP．LC3 上调，其中干扰质粒样品No．705MAP．LC3mRNA表达量上调至空白对照组的 h后Western 5198．39±0．04％(p0．05)；72 蛋白表达情况，4组行shRNA干扰的细胞p110蛋白表达出现不同程度下调，其中干 I shRNA阻断I型P13K信号传导通路对人胃癌SGC7901细胞的影响 中文摘要 扰质粒样品No．705 结论：成功构建的靶向shRNA质粒可有效阻断I型P13K信号传导通路，抑制 靶基因P13KCAmRNA以及相应蛋白的表达，上调自噬相关基因MAP．LC3mRNA的 mRNA3090-31 表达。基于P13KCA的 18位点碱基设计的干扰序列 的效果最佳。 shRNA 关键词：I型P13K 自噬 凋亡 作 者：马人杰 指导老师：邢春根 II shtL冀A隧鼗l登P13K信号传导逶瑟瑟入篱癌SGC7901缨戆匏彩瘸 英文揍要 Human EffectsofshRNAInhibitClassIP13Kon SGC7901