羟乙基纤维素接枝改性及其用于蛋白质和DNA分离研究.pdf

摘要 摘要 毛细管电泳(CE)是分析带电生物大分子如蛋白质和DNA等最重要的技术 之一。它具有分离效率高、分离速度快、样品和试剂消耗量少和易于实现自动化 的特性。在毛细管电泳分离蛋白质时，由于毛细管内表面的硅羟基解离(pI--I3) 形成带负电的吸附点，使管壁对带正电荷的碱性蛋白质产生强烈的吸附，导致蛋 白质信号峰拖尾、峰形展宽、分离效率与迁移时间的重复性下降，甚至形成不可 逆吸附使分离无法进行。解决蛋白质在毛细管壁上吸附的有效办法之一就是对毛 细管电泳柱进行涂覆。毛细管涂层的形成大致可分为两类：共价键合和物理吸附。 共价键合涂层稳定性较好但制作工艺麻烦；物理吸附方法既简便易行又具有较高 稳定性，并且涂层再生能力强，因而备受青睐。 在毛细管电泳分离双链DNA(dsDNA)时，筛分介质需同时具有高筛分能 力和自涂覆能力。目前，无胶筛分介质(即非交联的高分子溶液)中，高分子量 线形聚丙烯酰胺(LPA)具有筛分能力强、读出长度长等优点。但是，高分子量 LPA溶液的粘度很高而且没有自涂覆能力。与之不同的是，聚MⅣ．二甲基丙烯 酰胺(PDMA)具有极好的自涂覆能力，但筛分能力较弱。如何研制一种兼具高 筛分能力和自涂覆能力的高分子溶液介质是DNA高效分析的一个重要课题。在 均聚物溶液介质很难同时满足所有筛分要求时，人们设计合成了一系列共聚物来 替代均聚物作为DNA的筛分介质。共聚物不仅可以综合不同单体的各种令人满 意的性能，还可以获得一些均聚物所不具备的特殊性能，因此就有可能通过适当 调节分子结构和化学组成而得到优良的综合性能。 本论文的目的是对天然高分子羟乙基纤维素(脏C)进行接枝改性，在保持 主链髓C高亲水性和筛分能力的同时，根据不同的分离目的，来合成不同功能 的接枝聚合物，主要工作如下： 1．羟乙基纤维素接枝改性聚合物的合成与表征 采用硝酸铈铵(CAN)在酸性溶液中发生氧化还原反应合成了羟乙基纤维 素接枝聚M 烯酸M 作简单，产品后处理简单，实验成本较低，并分别用核磁共振(1HNMR)和红 外光谱(FTIR)对产物进行了表征。 2．HEC-g-PDMA在蛋白质分离中的应用 是接枝上的PDMA链段，PDMA良好的疏水性能使得聚合物涂层具有很好的稳 摘要 定性，在起到稳定和抑制电渗流作用的同时，在pH=36范围内，实现了对三 种碱性蛋白质细胞色素C(CytochromeC)、溶菌酶(Lysozyme)和核糖核酸酶 度的HEC詈PDMA表现出不同的蛋白质分离性能，其中接枝密度最高的 HEC-g-PDMA．3具有最高的分离效率，但是分离时间稍长。此外，还利用石英 晶体微天平(QCM)定量的表征了HEC-g-PDMA的抗蛋白质吸附性能。 3．HEC-g．PDMA在dsDNA分离中的应用 HEC-g-PDMA在作为聚合物涂层应用于毛细管电泳分离蛋白质的同时，因 为HEC和PDMA都具有很好的筛分性能，而接枝上的PDMA还有很好的涂覆 分离。在对m×174／HaeIII digest样品进行毛细管电泳分离实验中，详细研究了聚 合物溶液浓度、聚合物接枝密度和分离电压对dsDNA分离性能的影响。在相同 但是聚合物溶液粘度也最大、分离时间也最长。 4．HEC-g-PDMAEMA在蛋白质分离中的应用 质子化，因此通过调节缓冲溶液pH值，可以改变PDMAEMA链段所带正电荷 数量，同时还可通过调节主链与支链的比例来调节整条聚合物的亲水性。这对毛 细管电泳分离碱性蛋白质具有重要意义，体现在：一方面，通过调节PDMAEMA 链段所带正电荷数量可以选择适宜分离的电渗流；另一方面，通过调节聚合物主 链的亲水性，既能保证涂层与管壁的牢固吸附，又能够抑制与蛋白质疏水基团的 相互作用，实现对蛋白质的高效分离。 关键词：毛细管电泳接枝聚合物蛋白质分离dsDNA分离羟乙基纤维素 n Abstract ABSTRACT oneofthemost forthe Capillaryelectrophoresis(CE)issig