蜜蜂丙糖磷酸异构酶基因克隆分析及原核表达和纯化研究.pdfVIP

蜜蜂丙糖磷酸异构酶基因的克隆分析及原核表达与纯化研究 中文摘要 中文摘要 蜜蜂是重要的经济昆虫，也是昆虫大量试验的模式材料。丙糖磷酸异构酶 TPI isomeraseorTIM，EC (Triosephosphate 5．3．1．1)是生物中广泛存在的一种糖 酵解酶，存在于多种组织中，催化二羟丙酮磷酸与3．磷酸甘油醛之间的可逆反应， 且在糖酵解、脂肪酸合成、糖原异生和戊糖磷酸途径中发挥着重要作用。为在分 子水平上探明TPl的生物学功能，本文从意大利蜜蜂(A；ismellifePaligustica)的肌 体上的丙糖磷酸异构酶。心阳，)基因的eDNA序列。运用生物信息学的方法对蜜 蜂丙糖磷酸异构酶基因及其编码蛋白序列进行了初步分析，得到了基因和蛋白质 组学研究中一些有价值的参数。彳懈P己具有多种二级结构形式，是典型的(甜p)8结 构，在SWISS．MODEL服务器三维建模后，运用ViewerLite 5．0进行序列编辑，获得 中的其他物种进行同源性分析。多重比对显示彳^彳豫隋多个保守结构，物种间的 整体相似度较高，与家蚕、德国小镰、黄粉虫、丽蝇蛹集金小蜂、水稻等物种的 基因相似性达69％以上，蛋白相似性达59％以上，用MEGA4软件按Minimum 研究意大利蜜蜂的系统发生、遗传变异以及家系、亚家系的亲缘关系提供理论依 据。将目的基因克隆至JjpGEX-4T-2原核表达载体上，并在大肠杆菌中得到了成功表 达，4,b时的表达量为总蛋白的42．1％。试验纯化了GST-A衍砰融合蛋白，并对产 物进行了浓缩；为研翘艘P旌真核细胞中的表达，构建了真核表达载体，为进 一步分析该酶的药理学活性提供参考。 关键词：丙糖磷酸异构酶意大利蜜蜂基因克隆原核表达纯化 作 者：徐剑 指导老师：陆小平 蜜蜂丙糖磷酸异构酶基因的克隆分析及原核表达与纯化研究 英文摘要 and Cloning，sequenceanalysis，prokaryoticexpression 1‘ ’ ’ ‘‘ I． ficationcationoIofa IS0merasefromIro triosephosphate P m elliferaligustica Abstract isnot aneconomicinsectwith butalsoa only agelongbreedinghistory Honeybee with valueintheoreticalresearchfield．111ehomodimeric modelanimal great enzyme an in has role isomerase，which triosephosphate important acid the shunt，conveys