小麦属Waxy基因5%27上游调控区序列变异分析.pdfVIP

小麦属Waxy基因5’上游调控区序列变异分析 研究生： 肖 伟 指导教师： 郑有良教授 摘 要 根据已报道的普通小麦Waxy基因5’上游调控和编码区序列设计特异引物，采 用PCR克隆的方法，获得了小麦属部分物种Waxy基因5’上游调控区序列信息，并 对序列变异进行了分析，其主要结果如下： 基因5’上游调控序列，进一步序列分析表明，I型序列(2条)与II型序列(2条) 在多个位置上存在保守区域和单核苷酸多态性，在17个位置出现了序列缺失(碱基 而II型序列不具有。 表明I型序列位于7D上，II型序列位于4A或7A上，分别回收克隆得到9条上游调 控序列，NCBI比对表明其均为Waxy基因5’上游调控序列，进一步序列分析表明， I型序列(4条)与II型序列(5条)在多个位置上存在保守区域和单核苷酸多态性， GCN4基序“AAGTCAAGTC， II型序列不具有。 (22条来自一粒小麦，1条来自拟斯卑尔脱山羊草，3条来自高大山羊草，8条来自 粗山羊草)，NCBI比对表明其均为Waxy基因5’上游调控序列，进一步序列分析表 nI 明，34条序列在多个位置上存在保守区域和单核苷酸多态性，在28个位置出现了序 列缺失(碱基数≥4)。同时，在-101 序“AAGTCAAGTC”，其余序列不具有。 四倍体B型(3条)，进一步序列分析表明，四倍体A型序列与四倍体B型序列在多 个位置存在保守区域和单核苷酸多态性，在21个位置存在序列缺失(碱基数≥4)。 GCN4基序“AAGTCAAGTC” ，四倍体A型序列不具有因此，推测四倍体A型序 列可能来自S基因组，四倍体B型序来自S1基因组。 5．利用特异性引物F和R，从4份六倍体小麦中得到13条序列，以中国春序列为标 准，7条序列为六倍体I型序列，5条序列为六倍体II型序列，1条序列为云南小型， NCBI比对表明其均为Waxy基因5’上游调控序列，进一步序列分析表明，13条序 列在多个位置存在保守区域和单核苷酸多态性，在20个位置出现序列缺失(碱基数 6．基于Waxy基因5’上游调控序列聚类分析表明，野生一粒小麦、栽培一粒小麦、 乌拉尔图小麦的序列聚为一类，拟斯卑尔脱山羊草、高大山羊草的序列聚为一类，粗 山羊草的序列聚为一类；I型序列与来自粗山羊草的序列聚在一起；II型序列和四倍 体B型序列与来自高大山羊草的序列聚为一类，四倍体A型序列、云南小型序列与 来自拟斯卑尔脱山羊草的序列聚在一起。可以看出，小麦属Waxy基因5’上游调控 区序列存在染色体组特异性，可利用其进行染色体组进化研究和分子标记开发利用。 关键词：小麦：Waxy基因；克隆：上游调控区：变异 IV of Gene of Variance AnalysisSequences Waxy 5’Upstream inWheat RegulationRegion Abstract totheconserved of and region According sequencesWaxygene5’upstreamregulation were to the 5’upstream encodingregion，thegene—specificprimersdesignedamplify fromwheat．ThePCR