体外冲击波对体外培养兔关节软骨细胞增殖及相关生长因子活性影响.pdfVIP

中文摘要 体外冲击波对体外培养兔关节软骨细胞 增殖活性的影响 摘 要 目的： 关节软骨缺损和损伤是骨关节外科常遇到的问题，常 由创伤和各种疾病(如骨性关节炎、骨软骨炎、骨坏死等) 引起。关节软骨损伤后自身修复能力有限，大的关节软骨 缺损常由纤维软骨而不是正常的透明软骨修复。纤维软骨 在生物化学和组织结构上与透明软骨不同，常因无力承担 长时间的关节内各种机械应力而退变。目前，关于促进关 节软骨缺损的修复、提高修复质量方面的研究颇多。但临 床上尚无一种方法能高质量的修复关节软骨损伤并达到很 好的远期疗效。 ShockWave 体外冲击波疗法(Extracorporeal 法，在治疗某些矫形外科和软组织疾病方面较传统外科方 法存在许多优势。近年来，发现ESW在治疗骨性关节炎 关分子生物学研究报道。 本课题利用体外培养的正常原代软骨细胞，施加不同 能量强度的ESW刺激，探讨ESW是否对关节软骨细胞的增 殖有影响，检测ESW对软骨细胞增殖情况的影响，ESW促 进软骨修复作用的分子生物学机理、适合软骨细胞增殖的 能量范围及ESW作为延缓OA发生发展的非侵入治疗方法的 中文摘要 可行性，为下步临床应用提供理论依据。 方法： 选用健康的3月龄新西兰兔20只，酶法消化正常兔膝 关节软骨获得软骨细胞。培养并传3代，用台盼蓝染色法 测细胞存活率。将传3代的软骨细胞随机分为四组，A组： X ESW能量0．5 200次；C组：ESW能量2．5×105Pa，200次；D组：空白 对照组。干预后培养48小时，通过台盼蓝染色计算细胞成 活率，细胞爬片HE染色后倒置相差显微镜观察形态，干预 后各组软骨细胞用台盼蓝染色检测细胞存活率，CCK-8法 生长曲线观察增殖趋势，ELISA检测兔膝关节软骨细胞 bFGF、PCNA、CTGF、CollagenII变化情况分析干预效果， 了解ESW对兔膝软骨细胞增殖活性的影响；用逆转录聚合 II 酶链反应法检测bFGF、CTGF、ColmRNA的表达。 lagen 记录原始数据，各组数据以均数±标准差表示，两组间均 数比较采用两样本t检验，运用SPSSl3．0统计软件进行数 据分析以相应的统计方法进行统计，以P0．05表示有统 计学意义。 结果： ’1、台盼蓝染色检测细胞增殖：台盼蓝染色后，死细胞 染成淡蓝色，而活细胞拒染，镜下观察发现，经ESW干预 后， B组细胞活性为(954-3)％，与A组、C组、空白对 照相比差异有统计学意义(PO．05)。 2、生长曲线：ESW对正常兔膝软骨细胞的影响显著， 和实验组B在缓慢增长期和指数增长期均较实验组C和空 中文摘要 白对照组有所增加(P(O．05)。但实验组B在第3日时间点 与其他三组比较有统计学差异(PO．05)。而且细胞增殖高 峰提前，表明适当能量的ESW可以明显在时间和数量上促 进软骨细胞的增殖。 3、细胞爬片HE染色，倒置相差显微镜观察：酶法消 化获得正常兔膝原代软骨细胞。倒置相差显微镜观察，刚 分离的软骨细胞形态呈轮廓清晰的圆形，核明亮而清楚， 具折光性、旋光性。悬浮在培养液中，细胞大小略有差异。 4h后大部分细胞开始贴壁，细胞也逐渐变得扁平透亮。24 小时后软骨细胞开始出现突起，细胞逐渐变成多边形。3 天后，软骨细胞进入对数生长期，细胞连片生长，边缘细 胞突起较长，细胞偏梭形，中央的细胞突起较短，呈多角 形。7天软骨细胞呈“铺路石”样改变。8天后细胞数量增 多，胞浆内容物增加，部分细胞形成细胞团块或软骨结节。 II显示： II