自体脂肪来源间充质干细胞复合脱细胞真皮基质修复兔关节软骨缺损实验研究.pdfVIP

中文摘要 自体脂肪来源的间充质干细胞复合脱细胞真皮基质 修复兔关节软骨缺损的实验研究 摘 要 由于负重关节面由透明软骨组成，软骨细胞被细胞外基 质包绕，几乎没有迁徙能力，不能聚集到创伤部位，因此， 软骨组织一旦发生损伤后自我修复能力十分有限。软骨缺损 常常引起关节疼痛及功能障碍甚至残疾，临床上缺乏有效的 治疗方法，从而促进了软骨组织工程技术地快速发展。软骨 组织工程涉及种子细胞、支架材料及生长因子、信号分子和 应力作用等环境方面的内容。其中种子细胞是影响组织工程 stem mesenchymal 能力做为组织工程的种子细胞来源而备受关注。 目的： 1探讨脂肪来源的间充质干细胞分离和培养的可行性， 为扩大和优化软骨组织工程种子细胞源提供实验依据。 2自体脂肪来源的间充质干细胞与脱细胞真皮基质 (acellularderma matrix，ADM)复合修复兔膝关节软骨缺损， 对修复组织进行组织学和组织病理学评分，评价修复效果， 为临床应用组织工程学方法修复关节软骨缺损提供理论依 据和奠定实验基础。 方法： 选用健康新西兰兔36只。剪碎的兔脂肪组织使用0．1％ I型胶原酶消化离心后获得自体ADMSCs后进行体外培养。 中文摘要 微镜观察细胞形态。取原代、第3代ADMSCs，采用细胞计 数法测定细胞生长曲线。 体外特定条件下诱导ADMSCs定向诱导分化为脂肪细 胞、成骨细胞及软骨细胞。ADMSCs成脂方向诱导组成为 地塞米松，1 0％FBS，0．1 方向诱导组成为DMEM，1 Ltmol／L地塞米 松，5099／mL抗坏血酸，1 子pl、50 rtg／ml抗坏血酸、6．25 诱导分化后用油红0染色，成骨方向诱导分化后用钴钙法碱 性磷酸酶染色及茜素红钙结节染色，成软骨方向诱导分化后 进行II型胶原免疫组化染色。使用特殊染色来证明ADMSCs 的多向分化潜能。 养至第3代，制成浓度为5×105／ml的软骨细胞悬液。将自体 移植于兔膝关节软骨缺损处。 ADM对照组和空白对照组。实验组髁间窝软骨缺损处植入 白对照组不作任何植入，分别于术后6周、9周和12周每组 各处死4只动物，取材对修复组织进行大体、组织学及免疫 组化染色观察，根据关节软骨组织学评分及组织病理学评分 标准对修复组织进行评分，数据输入SPSS16．0软件，用随 中文摘要 机分组的SNK．q法进行统计分析，比较各组的评分差异是否 具有统计学意义。 结果： 融合。 2ADMSCs表面抗原的鉴定：流式细胞仪检测结果显示 细胞表面抗原CD44呈阳性表达。 3ADMSCs生长睦线呈“S形。贴壁2d后细胞开始增殖， 7d进入增殖高峰期，9d后进入平台期。 4ADMSCs成脂诱导分化后经油红染色显示分泌红色 脂滴的脂肪细胞：成骨诱导分化后碱性磷酸酶染色呈黑色沉 淀，茜素红染色呈钙化结节；成软骨诱导分化后II型胶原免 疫组化染色阳性。 5电镜下可见ADM呈多孔疏松结构，孔隙率较好，适 合ADMSCs生长。 合较好，无支架材料残留。ADM对照组和空白对照组为纤 对照组与空白对照组差别无显著性意义(PO．05)；组织病理 显著性差异(PO．05)。 表面光滑，与周围软骨整合良好。ADM对照组和空白对照 中文摘要 对照组与空白对照组差别有显著性(PO．05)；组织病理学评 性(PO．05)。 8 复区的软骨细胞含II型胶原，与周围软骨结合良好。 结论： 1兔脂肪来源的间充质干细胞在体外具有生长稳定，增 殖较快的特点，在体外诱导培养体系下可分化为脂肪细胞、 成骨细胞和软骨细胞，符合间充质干细胞多向分化潜能的特 征。 2脱细胞真皮基质材料适合兔脂肪来源的间充质干细胞 的黏附和增殖，是软骨组织工程较为理想的支架，二者复合 后植入软骨缺损区能够修复关节软骨。