pEgrIFNγ基因放射治疗对荷瘤小鼠抑瘤效应的研究.pdfVIP

第21 卷 第3 期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vol.21, No.3 2003 年8 月 J. Radiat. Res. Radiat. Process. August 2003 pEgr-IFNγ 基因- 放射治疗对荷瘤小鼠抑瘤效应的研究 杨 巍 李修义 李秀娟 田 梅 龚守良 （吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室 长春 130021 ） 摘要 探讨pEgr−IFNγ基因−放射治疗小鼠体内抗肿瘤作用的适宜照射剂量和质粒注入量。观察不同剂量X 射 线照射及瘤内不同量pEgr−IFNγ重组质粒注入，基因−放射治疗在接种B16 黑色素瘤小鼠体内抑瘤效应的差 异，并用酶联免疫吸附法（ELISA ）法检测各组小鼠外周血IFNγ 含量。结果表明，质粒注入后接受20Gy X 射线照射组照后3—27d ，肿瘤生长速率明显低于2Gy 和10Gy 照射组（p ＜0.001 ），且小鼠平均生存时间明显 延长（p ＜0.001 ）。质粒注入量为20µg 或30µg 的联合治疗组照后3—27d ，肿瘤生长速率明显低于注入量为 10µg 的联合治疗组（p ＜0.05—0.001 ），且平均生存时间明显延长（p ＜0.01 ）。基因−放射联合治疗组受照射后第1 天 和第3 天外周血IFNγ含量明显高于单纯基因治疗组均为（p ＜0.05 ）和对照组，分别为（p ＜0.01 ，p ＜0.05 ）。 结果显示，pEgr−IFNγ 基因−放射治疗小鼠体内抗肿瘤作用的适宜照射剂量为20Gy，质粒注入量为20µg ；联 合治疗组可能通过诱导瘤内IFNγ 基因表达增强，使血液中的IFNγ 浓度升高，进而增强机体免疫功能和抗肿 瘤能力。 关键词 pEgr−IFNγ重组质粒，基因−放射治疗，B16 黑色素瘤，X 射线 中图分类号 Q785 ， R811.5 ， R322 肿瘤的基因−放射治疗是将辐射诱导性基因的 表达水平及放疗效果三者之间的关系，为肿瘤IFNγ 调控序列与肿瘤杀伤基因相偶联，转染肿瘤细胞， 基因−放射治疗的临床应用提供理论和实验依据。 在对肿瘤实施局部放疗的同时诱导肿瘤杀伤基因表 1 材料和方法 达增强，产生辐射和基因表达产物的协同抑瘤作用。 1.1 动物及细胞 该疗法一方面将放疗与基因治疗有机结合，发挥协 [1, 2] ；另一方面，由于辐射具有靶向性和可控 昆明小鼠，雌性，体重 16—18g，健康，购自 同作用 性，实现了对杀伤基因表达的时空调控[3] 。因此， 本校实验动物部。B16 黑色素瘤细胞株，本室保存， 体外完全培养基传代培养。 基因−放射治疗近年来成为肿瘤治疗领域新的研究 热点之一。大量资料表明[4, 5] ，电离辐射可激活 1.2 质粒的提取与注入 Egr−1 启动子并诱导下游抗肿瘤基因表达增强。根 将转化pEgr−IFNγ重组质粒（吴丛梅博士构建 据上述机理，文献[6]成功构建了pEgr−IFNγ重组质 并提供）的大肠杆菌接种于100mL LB 培养基中， 粒，并进行了辐射诱导下的抑瘤实验研究。结果表 37℃、170r / min 振摇16—18h，碱裂解法大量提取 明，在电离辐射诱导下，与Egr−1 启动子连接的IFNγ 质粒。每只动物移植肿瘤内局部注射由20µg 脂质体 （GIBCO 公司）包裹的质粒（P ），对照组及单纯照 基因表达增强并且提高了放疗效果。本研究在此基 射组注射0.1mL PBS 。 础上进一步观察不同剂量X 射线照射及