微生物分离与纯化技术课件.ppt

一、实验目的 二、实验器材及设备 1、无菌培养皿(直径90毫米)、无菌吸管1毫升、盛有90毫升无菌水的锥形瓶、盛有9毫升无菌水的试管5支。 2、培养基(已灭菌的)、土壤颗粒。 三、微生物分离纯化的操作方法 1、取样 （取土样10g） 2、稀释土壤悬浊液 稀释土壤悬浊液操作注意： 3、平板的制作 每组准备两套无菌培养皿，在皿底注明稀释液浓度（10-4、10-5、10-6 中任选两种浓度)、菌名如黑曲霉、班级、组别。 融化锥形瓶中的培养基，放在45-50℃ 恒温水浴锅中备用 制备混合液平板：无菌操作下，打开培养皿在无菌培养皿一边加两滴链霉素液，另一边加１mL土壤稀释液（注意不要让两液相混），倒入45-50℃融化的真菌培养基约1/4-1/3培养皿高度。培养皿平放在桌上顺时针、逆时针轻轻转动，混匀皿中物质。培养基冷凝后即成平板。 恒温培养:平板倒置于28-30℃恒温箱中,培养5-6天后观察真菌菌落形态。 转接纯化:挑取单个菌落,接种到新鲜平板上,培养观察,直至纯化。 平板制作的操作注意： 融化培养基时不要溢出烧瓶或糊底 无菌操作下，打开培养皿的操作 一根１mL移液管多次移液先移低浓度悬浊液，再移高浓度悬浊液。 移液管可以用稀释悬浊液的那根在无菌操作下接着做，也可另取一根无菌的。 为什么培养皿要倒置培养 (二)平板划线分离法（以分离细菌为例） 每组准备两套无菌培养皿,在皿底菌名、班级、组别。 融化培养基，在45-50℃ 恒温水浴锅中备用 制备平板：无菌操作下，打开培养皿，倒入45-50℃融化的细菌培养基约1/4-1/3培养皿高度。培养皿平放在桌上，培养基冷凝后即成平板。 平板划线:无菌操作下,用接种环挑取一环10-1土壤悬浊液,在平板上轻轻划线(切勿划破培养基)划线的方式可取下图 平板划线的操作注意： 接种换环的使用 分区域划线，划完第一个区域，烧掉接种环上的剩余物，接种环冷却后，通过第一次划线部分，做第二次划线，依次类推，目的是稀释微生物浓度，使长成单个菌落。 * 微生物分离与纯化技术 环境学院　朱红力 环境微生物课程实验 掌握从土壤中分离培养微生物的方法，从而获得若干种微生物纯培养技能。 3、接种环、酒精灯、恒温箱(培养箱)、超净工作台等。 介绍两种方法：稀释混合平板法和平板划线法 （一）稀释混合平板分离法（以分离真菌为例） 依次编号：按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5及10-6 锥形瓶中的玻璃珠将颗粒状样品打散 无菌操作：超净工作台、酒精灯、无菌吸管 移液管移液后多余的液体处理 试管中悬浊液须持移液管吹洗三次搅匀 恒温培养:平板倒置于28-30℃恒温箱中,培养１-２天后观察细菌菌落形态。 转接纯化:挑取单个菌落,接种到新鲜平板上,培养观察,直至纯化 *