不同厚度细胞薄切片对AFM图像反差的影响.pdfVIP

．562． 生物化学与生物物理进展Pmg．Bioch哪．Biophys． 2005；32(6) 不同厚度细胞薄切片对AFM图像反差的影响术 李鑫辉D季彤∞孙洁林D张陈平2，胡钧1，扑’ (1)上海交通大学Bio-X生命科学研究中心纳米生物学实验室，上海200030； ∞上海第二医科大学附属第九人民医院，上海20001l； 3)中国科学院上海应用物理研究所，上海201800) 摘要利用原子力显微镜(AFM)观察超薄切片的表面，探索表面形貌与切片厚度、朝向等因素的关系以及对图 像反差的影响．选择三种不同类型的细胞，培养后按电镜超薄切片法固定、包埋并切片后，将不同厚度的切片区 分上下表面转移到云母上，—6正M在空气中以接触模式进行观察．结果发现，切片表面细胞相对包埋介质的凸起与 凹陷与切片本身的厚度密切相关，并随切片厚度的不同呈现有规律的变化．实验统计结果显示这种现象可能具有 普遍性． 关键词表面形貌，图像反差，超薄切片，原子力显微镜 学科分类号Q6—3 在生物学的发展历程中，显微术的作用至关 重要，尤其是早期显微学领域的某些重要发现被视 等阳捌已将AFM图像的分辨率提高到可以与TEM 为具有里程碑的意义，直接促成了细胞生物学及其 相比拟的水平，并且局部的精细结构更为清晰． 相关学科的突破性发展．通常显微图像反差直接与 TEM图像的反差机制已经得到普遍认可，人们也已 分辨率相关，因此，如何增强反差一直是显微学研 掌握了不少提高生物样品反差的方法渊．但AFM 究的重点之一㈣．可是某些显微图像的反差来源复 对生物样品超薄切片成像反差高低的研究，很少有 杂，有的到现在也没有完全了解，如组织染色技术 文献报道，而更为基础性的问题是：为什么切片表 中某些染料与细胞成分相互作用并显色的过程就不 面高低起伏的形貌反映的是有关细胞结构的信息? 甚清楚嗍，人们在具体操作时常常凭经验进行，较 影响细胞切片AFM图像反差的因素很多，可 少涉及反差机制本身．本文利用原子力显微镜 能包括以下几个方面的原因：样品及包埋介质、切 (AFM)观察细胞切片表面，并考察了细胞切片的不片的厚度、切片面的选择等．本工作选择了三种不 同厚度对AFM图像反差的影响，并探讨细胞切片 同类型的细胞，按照常规的电镜超薄切片法包埋并 AFM图像的反差机制． 切片后，选择不同厚度的切片转移到云母表面，然 AFM是在20世纪80年代发展起来的新一代后利用AFM观察不同厚度切片的正反表面．结果 显微镜【Ⅻ．自其诞生以来，AFM就广泛地用于生物 发现，切片表面的高低起伏(指细胞平均高度与周 材料的研究，包括DNA、蛋白质、病毒、细胞器、 围包埋介质的高度相比，以“凸起”和“凹陷”描 细胞以及组织等等[¨卅7】，研究的内容也涉及结构与 述之)与本身的厚度密切相关，并呈现有规律的变 功能、相互作用及其他物理、化学特性等【，嘲．根 化，即总体随着厚度的增加，正面的细胞高度会发 据AFM的成像原理，其高度图像反映的是样品表 生凹陷一凸起一凹陷的变化，并在60～80m的厚 面高低起伏的形貌信息．对于组织或细胞的超薄切 度范围内，凸起最显著，反面的细胞虽然一直表现 片，删图像不仅显示了细胞的超微结构，而且 为凹陷，但在上述范围内凹陷程度最低．当切片厚 分辨率达到可以和电镜相比的水平．如Amako，度超过120衄时，正反面的凹陷程度随厚度增加 ushiki和Y锄ashina等是较早开始利用伽mI观察 有增大的趋势．实验中选择的三种细胞，每种样品 生物样品超薄切片的，他们都发现切片表面的 数超过20，都表现有相同的趋势，反映了这种现 AFM图像显示的是有关细胞结构的信息艄．随后 osada等口司继续在这方面努力，并将透射电镜(TEM)