二乔刺槐愈伤组织超低温保存及适宜降温方法.pdfVIP

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2015-09-11 发布于湖北
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二乔刺槐愈伤组织超低温保存及适宜降温方法.pdf

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二乔刺槐愈伤组织超低温保存及适宜降温方法.pdf

第45卷第lO期林业科学 V01．45．No．10 SCIENlrIA 009 2009年10月 SlLVAESINICAE Oct．，2 二乔刺槐愈伤组织超低温保存及适宜降温方法* 翟晓巧1’2 程斐1 朱延林2 (1．河南农业大学郑州450002；2．河南省林业科学研究院郑州450008) 摘要：二乔刺槐叶片在添加5mg·L“6-BA的Ms培养基上诱导出愈伤组织。将愈伤组织在冻存液(Ms+10％ DMSO+0．5 tool·L“蔗糖)中于4℃预冷2h，置人程序降温仪以1℃·min。的速率降温至一7℃停留1h，再以 0．1℃·min“的冷却速率将样品冷却至一20℃，平衡1 h，接下来以0．3℃·rain。的冷却速率将样品冷却至一40℃投入液氮保存，是适宜的降温方法。液氮保存1天后以38℃温水浴解冻。解冻后将愈伤组织用液体培养基(MS+ 6-BA5mg·L“+30g·L“蔗糖)洗涤后转入恢复培养基暗培养，14天后放于光照下培养。光培养3天后冻后愈伤组织上开始长出新生愈伤组织颗粒，成活率最高可达52％，新生愈伤组织可诱导成苗。关键词：二乔刺槐；愈伤组织；超低温保存；降温方法中图分类号：$722．3+7文献标识码：A 文章编号：1001—7488(2009)10—0049—06 Methodsof for ofCalKofRobiniabella-rosea LoweringTemperatureCryopreservation Zhai FeilZhuYanlin2 Xiaoqia01·2Cheng (1．1tenan 450002；2．ttenan AgriculturalUniversityZhengzhou AcademyofForestryZhengzhou450008) Robiniabella-roseacaUiwereinitiatedfromtheleavesonMSmedium with5 6-BA．Thecalli Abstract： supplementedmg·L一1 werecooleddownat4℃for2hina tool。L-1Sucrose)，andfuaher to cryoprotectant(MS+10％DMSO+0．5refrigerated 一7℃atarateof a freezer．Afteronehourat一7℃for1h．thecaUi using temperature—changing l℃‘min“by programmed inthe werefurther to一20℃atarateof incubatedforanotherhourat cryoprotectant refrigerated 0．1℃‘rain～．Being ealliwerecooleddown arate thenthecalliweretransferredand in 一20℃．the to一40℃atofO．3℃·min一1and