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2015-09-12 发布于重庆
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实验四血液中葡萄糖的测定.ppt

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实验四血糖的测定---邻甲苯胺法标准曲线法实验目的掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法。掌握标准曲线法在定量分析中的应用实验原理本实验采用临床上常用的邻甲苯胺法，利用葡萄糖在热的醋酸溶液中脱水后与邻甲苯胺缩合，生成青色的Schiff碱，对波长630nm的光有特征吸收，可比色定量测定。由于邻甲苯胺只与醛糖作用而显色，故此种测定法不受血液中其他还原物质的干扰，测定时也无需去除血浆或血清中的蛋白质。原理反应式实验操作一、标准曲线的制备（标准品梯度稀释）取l0ml容量瓶5只，分别编号1，2，3，4，5，依次加入葡萄糖贮存标准液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0(ml)，再以饱和苯甲酸溶液稀释至l0ml刻度，混匀。上述溶液l00ml葡萄糖含量分别为50，100，200，300，400(mg)。二、显色比色及结果以“0”号管为对照，用分光光度计在630nm处比色测定，以各管的吸光度为纵坐标，相应管中葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。根据测定管吸光度，通过标准曲线即查得含量。附：标准样品法定量测定 * * 取7只试管，编号，按下表操作。混匀后，置沸水浴中煮沸15min，取出，在冰水浴中冷却。邻甲苯胺法测定血糖操作表蒸馏水 0.1ml __ __ 邻甲苯胺 5ml 5ml 5ml 葡萄糖标准品 __ 0.1ml __ 待检血清 __ __ 0.1ml 试剂空白管标准管检测管取3只试管，编号，按下表操作。混匀后，置沸水浴中煮沸15min，取出，在冰水浴中冷却。以空白号管为对照，用分光光度计在630nm处比色测定，记录各管吸光度，数学计算，获得待检血清中血糖含量值。 *