细菌内毒素检查方法的研究.docVIP

左卡尼汀注射液细菌内毒素检查方法的研究 概述：左卡尼汀，是一种广泛存在于机体组织内的氨基酸，其重要功能是促进其氧化分解，为细胞提供能量，促进脂类代谢。临床上主要用于治疗冠心病、心绞痛、心律失常，亦可作为治疗血液透析患者的辅助药物。目前《中国药典》2010年版并未收录该品种。也尚无国家标准对其进行细菌内毒素检查。因此，参照《中国药典》2010年版二部附录收载的细菌内毒素检查法，对本品进行了细菌内毒素检查的方法研究。 1．验证目的 1.1 考察鲎试剂的灵敏度是否准确； 1.2 考察检验人员的操作方法是否准确及试验条件是否符合规定； 1.3 检验在某一浓度下的供试品对于鲎试剂与内毒素有无干扰作用。 2．验证要求 为确保细菌内毒素检验结果的准确可靠，当建立产品的细菌内毒素检查时，需确定供试品在多大的稀释倍数或浓度下对内毒素和鲎试剂的反应不存在干扰作用，为能否使用细菌内毒素检查法提供依据。并且验证当供试品的配方和工艺有变化，鲎试剂来源改变或供试品阳性时供试品是否存在干扰作用。 由于干扰试验检验的是在供试品存在的情况下内毒素与鲎试剂的反应是否正常，与所使用鲎试剂灵敏度无关，因此在干扰实验中原则上可使用任一灵敏度的鲎试剂。 3．验证材料及设备 3.1 样品信息 3.1.1 样品名称:左卡尼汀注射液 3.1.2 批号101010013.1.3 规格：5ml:1g 3.2 仪器与试药 3.2.1 仪器:ET-96内毒素凝胶法测定仪；ZH-2型自动漩涡混合器。 3.2.2 试药:细菌内毒素工作标准品(规格：每支10 EU，批号：1007010，湛江博康海洋生物有限公司)；细菌内毒素检查用水(BET水，规格：每支5ml，批号：100507，湛江博康海洋生物有限公司)；鲎试剂A(TAL，规格：每支0.1ml，批号： 1002031、1005100，灵敏度分别为:0.250、0.500 EU／ml，湛江博康海洋生物有限公司)；鲎试剂B(TAL，规格：每支0.1ml，批号:100802，灵敏度为:0.500EU／ml，厦门市鲎试剂实验厂有限公司)；左卡尼汀注射液 (规格：5ml:1g，批号10101001。 4 方法与结果 4.1 细菌内毒素限值的确定 按《中国药典》2010年版二部中细菌内毒素检查法的规定，根据公式L=K／M，式中L为供试品的细菌内毒素限值，K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂K=5 EU／(kg·h)，M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，人均体重按60kg计算，注射时间若不足1 h，按1 h计算。根据产品说明书，单次血透后最大剂量是10～20 mg／kg，2～3 min静脉推注1次，故左卡尼汀注射液的成人临床用量单次使用剂量按20mg计算，人均体重按60kg计算，推注时间按1 h计算，则M=20 mg／(kg·h)，L=K／M=5／20=0.25EU／mg。故确定本品细菌内毒素限值为0.1EU／mg。 4.2 鲎试剂灵敏度复核试验 按照《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法规定，进行鲎试剂的标示灵敏度(λ)复核。结果见表1～表3。 表1 鲎试剂灵敏度复核试验(1002031批) 内毒素浓度(EU/ml) 0.500 0.250 0.125 0.060 NC 反应终点浓度 重1 + + + - - 0.125 复2 + + + - - 0.125 管3 + + - - 0.25 数4 + + - - 0.25 λc=lg-1() =lg-1［(lg0.125+lg0.125+lg0.25+lg0.25)/4] =0.177(EU/ml) λc 在0.5λ～2λ范围内，符合规定。故1002031批鲎试剂以标示灵敏度0.250 EU/ml为该批鲎试剂的灵敏度。 表2 鲎试剂灵敏度复核试验(1005100批) 内毒素浓度(EU/ml) 1.000 0.500 0.250 0.125 NC 反应终点浓度 重1 + + + - - 0.250 复2 + + - - - 0.500 管3 + - - - 1.000 数4 + + - - 0.500 λc=lg-1() =lg-1［(lg0.250+lg0.500+lg1.000+lg0.500)/4] =0.500(EU/ml) λc 在0.5λ～2λ范围内，符合规定。故1005100批鲎试剂以标示灵敏度0.500 EU/ml为该批鲎试剂的灵敏度。 表3 鲎试剂灵敏度复核试验(100802批) 内毒素浓度(EU/ml) 1.000 0.500 0.250 0.125 NC 反应终点浓度 重1 + + + - - 0.25