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分子生物学实验课考核考试题库 1、PCR原理是什么？ 2、PCR一般体系应加入哪些试剂？ 3、PCR防止其它DNA污染，应注意哪些问题？ 4、影响PCR产物产量的因素主要有哪些？ 5、引物设计应注意哪些问题？ 6、简述克隆某一原核生物基因片段一般操作步骤？ 7、什么是质粒？质粒的基本性质有哪些？ 8、质粒抽提实验中溶液I、II、III各有什么作用？ 9、碱裂解法抽提质粒DNA的基本原理是什么？ 10、在碱裂解法提取质粒DNA操作中应注意哪些问题？ 11、在碱裂解法提取质粒DNA时， 酚/氯仿的作用是什么？ 12、碱裂解法提取的质粒DNA分子一般有几种构象？电泳时移动速率有何差异？ 13、提取植物基因组DNA的基本原理是什么？在操作过程中应该注意什么？ 14、在植物基因组提取过程中，DNA 降解的可能原因？ 15、在植物基因组提取过程中，提高 DNA 产量的措施？ 16、在使用苯酚进行DNA提取时应该注意什么？ 17、在提取植物基因组DNA过程中，使用苯酚与氯仿的作用是什么？ 18、在植物基因组提取过程中，该如何检测和保证基因组DNA的质量？ 19、什么是限制性内切酶？ 20、常见的Ⅱ型限制性内切酶切割双链DNA后会产生 末端或 末端。 21、下列有关限制性内切酶的描述，错误的是：（ ） A．一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B．限制性内切酶的活性受温度的影响 C．限制性内切酶能识别和切割RNA D．限制性内切酶可以从原核中提取 22、现有一长度为l 000 bp的DNA分子，用限制性核酸内切酶EcoR I酶切后得到的DNA分子仍是l 000 bp，用Kpn I单独酶切得到400 bp和600 bp 2种长度的DNA分子．用EcoR I，Kpn l同时酶切后得到200 bp和600 bp 2种长度的DNA分子。请画出该DNA可能的酶切图谱。 23、一个限制性内切酶的识别序列和切割位点是5ˊ一G↓GATCC一3ˊ，在质粒上有该酶的一个切点，请画出质粒被该限制性内切酶切割后所形成的黏性末端。 24、基因工程中，切割目的基因和载体所用的限制酶及切口必备的特点是( ) A．可用不同的限制性内切酶，露出的黏性末端必须相同 B．必须用相同的限制性内切酶，露出的黏性末端可不相同 C．必须用相同的限制性内切酶，露出的黏性末端必须相同 D．可用不同的限制性内切酶，露出不同的黏性末端 25、在遗传工程技术中，限制性内切酶主要用于（ ） A. 目的基因的提取和导入 B. 目的基因的导入和检测 C. 目的基因与运载体结合和导入 D. 目的基因的提取和与运载体结合 26、在分子生物学实验中，常使用微量移液器，请说明在使用微量移液器时需要注意什么？ 27、现有量程为0.1-2.5 μl；1-10 μl；2.5-20 μl；10-200 μl；100-1000 μl的移液器各一支，请问，当吸取0.15 μl，0.5 μl，5 μl，15 μl，100μl，750 μl液体时，各需要选取那种最佳量程范围的移液器？ 28、本学期我们学习了CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞和热休克法转化质粒DNA，你还知道哪些方法可以制备大肠杆菌感受态细胞和转化的方法？ 29、在质粒DNA转化大肠杆菌时，是如何进行筛选的？ 30、蓝白班筛选的原理是什么？ 31、在质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞时，如果将用来浸泡玻璃棒的酒精引燃起火该如何处理？ 32、卫星菌落出现的原因是什么？该如何避免？ 33、影响所制备感受态效率的因素有哪些？ 34、转化后为什么要温育1小时，为什么加入的是无抗培养基？ 35、如果实验中对照组本不该长出菌落的平板上长出了一些菌落，你将如何解释这种现象？ 36、在转化实验中，实验组和对照平皿应有什么样的结果？如何解释这个结果？ 37、在学习制备感受态细胞时，为什么要保证细胞密度108/ ml？甘油的作用是什么？ 38、通过分子生物学实验，你认为自己掌握了哪些实验技能？你对分子生物学实验有哪些建议与意见？ 39、用琼脂糖凝胶分离DNA的理论依据是什么？ 40、为何在对凝胶进行操作时要带一次性手套？ 41、DNA 分子在电泳缓冲液中带正电荷还是负电荷？它在电场中的移动方向如何？电泳中你观察到哪些现象？ 42、影响琼脂糖凝胶DNA迁移速率的因素有哪些？分别有何种影响？ 43、若有60 kb～100 kb大小的系列DNA片段要进行分离鉴定，应采取哪种类型的电泳方法才能进行有效分离？为什么？ 44、在质粒提起实验中，用溶液III处理后，要进行离心分离。此时，质粒DNA分子在 （上清液，沉淀物）中，细菌基因组DNA分子在 （上清液，沉淀物）中。 45、在质粒提起实验的最后两步