若干CIMMYT春小麦的HMW.docVIP

若干CIMMYT春小麦HMW-GS的组成及其品质状况分析研究 赖勇 甘肃农业大学农学院，甘肃兰州（730070） 摘 要：本实验对59个CIMMYT春小麦的HMW-GS组成及其品质状况进行了分析研究，为了给小麦品质遗传改良提供参考。HMW-GS组成结果表明，在分析的59个小麦材料中，检测到Glu-A1位点编码的HMW-GS有3种类型，分别是1、2*和Null，其中Null出现的频率最高，为50.85％；Glu-B1位点编码的HMW-GS有16、9*、6+8、6+9、7+8、7+9、7+18、7+9*、14+15、15+8、6+7+9、7+15+9*、14+15+9共13种类型，其中14+15和6+9出现的频率最高，分别是32.20％和30.51％；Glu-D1位点编码的HMW-GS有14种类型，分别是10、12、12*、2+10、2+12、2+12*、2.2+10、3+10、3+12、5+10、5+12、5+12*、2+5+12、2+10+12*，其中10出现的频率最高，为25.42％。共检测到32种HMW-GS组合变异类型，其中（1，14+15，12）出现的频率最高，为10.17％。品质分析结果表明， CIMMYT春小麦品质[1，2] High Molecular Weight Glutenin Subunit, HMW - GS)和低分子量谷蛋白亚基( Low Molecular Weight Glutenin Subunit, LMW - GS)。高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS)基因分别位于第1同源群1A、1B、1D1AL、1BL、1DGlu-A1、Glu-B1和Glu-D1Glu-1位点，其亚基组成对小麦的生理生化特性及品质尤其是烘烤品质有重要影响[2，3，4]CIMMYT）育成的春小麦，目前在国内主要是间接应用[5，6]些CIMMYT材料HMW – GS[5]。因此，本文对CIMMYT春小麦的高分子量谷蛋白亚基组成及品质进行研究分析，以期为这些材料在小麦品质改良中的利用提供参考依据。 1.材料与方法 供试品种是采用甘肃农科院引进的CIMMYT春小麦，一共59份，于2006年在甘肃省农科院种植的。小区面积1×2㎡,600株/㎡，重复3次。黄熟收获，室内放置3个月后，在甘肃农业大学农科楼二楼作物遗传育种谷物品质分析实验室进行品质分析。本实验对59个品种进行数字编号，以中国春和马奎斯作为HMW– GS分析对照，永良4号为品质分析对照。 1.1 HMW – GS组成分析实验 1.1.1 样品提取 取样品籽粒各一粒，称重并记录各自重量，然后在研钵中捣碎再倒入1.5mL写好编号的离心管中。按1：10（种子重mg，提取液uL）比例向向离心管中加入50％异丙醇提取液，振荡混匀后放入62.5℃水浴锅中水浴30min，期间取出振荡3次，然后取出离心管置于室温条件下提取2h，最后在10000rpm下离心10min，弃去上层清夜。至此第一次提取过程完成。 第二次提取过程：同样按1：10（种子重mg，提取液uL）比例加入50％异丙醇提取液，振荡混匀后放入62.5℃水浴锅中水浴30min，期间取出振荡3次，然后取出离心管置于室温条件下提取2h，最后在10000rpm下离心10min，弃去上层清夜。 按1：7（种子重mg，提取液uL）比例加入HMW – GS样品提取液，振荡混匀后放入62.5℃水浴锅中水浴2h，期间取出振荡4-5次。然后取出离心管，将其在10000rpm下离心10min，后取出于4℃冰箱中保存待用。 1.1.2 制胶 将制胶所需的器材和试剂准备好。表1为分离胶贮液和浓缩贮液的配比。第一步：灌分离胶。将40％丙烯酰胺（Acr）、2％甲叉双丙烯酰胺（Bis）、3M三羟基胺基甲烷（Tris）（pH=8.8）、蒸馏水、10％十二烷基硫酸钠（SDS）分别按比例加入50mL烧杯中，各溶液的量见表1，并混匀。然后加入10％过硫酸氨（APS）110.6uL，最后加入四甲基乙二胺（TEMED）33uL，拌匀后迅速灌到事先准备好的玻璃板中，玻璃板要倾斜一定的角度以防止胶中出现气泡，灌好后立即在胶的表面加正丁醇压平。室温下静置30min，使胶充分聚合。 第二步：灌浓缩胶。用滤纸先吸干正丁醇。将40％Acr、2％Bis、0.5M Tris（pH=6.8）、蒸馏水、10％SDS分别按比例加入50mL烧杯中，充分混匀，再先后加入10％APS、TEMED，混匀立即倒在分离胶上面，迅速插入样品梳。室温下聚合15min后拔出样品梳，用电极缓冲液冲洗每个点样孔。 表1表1为分离胶贮液和浓缩贮液的配比 分离胶贮液 浓缩贮液 40％Acr 6mL 1mL 2％Bis 3.2mL 0.533mL 3M Tri