多种植物的ISSR分子标记及相似性分析.docVIP

生物大实验报告 学院： 班级： 姓名： 学号： 组别： 指导老师： 多种植物的ISSR分子标记及相似性分析 摘 要：近年来，人们发现了一种新型的分子标记——ISSR。它是以生物大分子的多态性为基础的遗传标记，能够直接对基因组DNA 进行分析，反映植物在遗传物质DNA水平上的差异并不受任何环境条件影响，是植物遗传育种领域内一项新兴技术。文章就是通过上述方法来分析五种不同植物的遗传多样性并建立了聚类树。 关键词：分子标记 ISSR DNA差异分析 Abstract: In recent years, people have discovered a new technology of molecular markers-ISSR. It based on the polymorphism of biological macromolecules genetic markers, which can directly be used in the genomic DNA analysis and can reflect the difference of plants in the genetic material of the DNA level and it is not effected by any environment condition .So, it is a new technology in the field of plant genetic breeding. The article analyse the five different plants genetic diversityis through the above method and set up the clustering tree. Key words: Molecule Marker Technology ISSR the analysis of DNA differences 1 前言 ISSR (inter-simple sequence repeat)标记是一种类似RAPD，但利用包含重复序列并在3’或5’锚定的单寡聚核酸引物对基因组进行扩增的标记系统，即用SSR引物来扩增重复序列之间的区域。其原理具体是，ISSR标记根据生物广泛存在SSR的特点，利用在生物基因组常出现的SSR本身设计引物，无需预先克隆和测序。用于扩增的引物一般为16-18个碱基序列，由1-4个碱基组成的串联重复和几个非重复的锚定碱基组成，从而保证了引物与基因组DNA中SSR的5’或3’末端结合，导致位于反向排列、间隔不太大的重复序列间的基因组节段进行PCR扩增。 2 ISSR的原理 简单序列重复区间扩增多态性(Inter-simple sequence repeat，ISSR)是一种新型的分子标记，Zietkiwicz(1994)等创建的一种简单序列重复区间扩增多态性分子标记。它的分子生物学基础是基因组中存在的简单序列(simple sequence repeat，SSR)， SSR 一样丰富的多态性。ISSR标记根据植物中广泛存在SSR 的特点，SSR 本身设计引物，ISSR—PCR扩增的引物通常为16～18 个碱基序列，1～4 个碱基组成的串联重复和几个非重复的锚定碱基组成，DNA中SSR的5 或3 末端结合， PCR 反映扩增SSR 之间的DNA 片段。ISSR 技术是在SSR 序列的5 或3 末端加上2～4 个随机选择的核苷酸作为引物，，，PCR 扩增反映的专一性。测定过程中以锚定SSR 寡聚核苷酸为引物，SSR 之间的DNA 序列为基础进行PCR 扩增， 17～22 个碱基的重复锚定引物扩增重复序列之间的片段，SSR 本身，SSR 技术简单得多，DNA 序列即可进行扩增，RAPD、SSR 更丰富的多态性。ISSR 典型的反映每个泳道可产生20 多条带， : Nagoka 和Ogihara 在小麦的ISSR 标记研究中发现ISSR 标记可获得几倍于RAPD 标记的信息量。SSR 在真核生物中的分布非常普遍，，ISSR- PCR 可以检测基因组许多位点的差异。 在实验中， ISSR DNA 中进行PCR 扩增，，DNA 中的任何序列信息即可检测，ISSR 技术可以快速、高效、灵敏地检测出基因组DNA 的多态性，，，ISSR 标记技术利用了基因组丰富的SSR 序列信息，SSR 相比，ISSR ，; 同时与RAPD 相比，ISSR ，，， RAPD 的简便、易操作等特点； 与RFLP、AFLP 相比，ISSR DNA用量小、安全性较高。由于上述优点，ISSR ×CTA