实时荧光定量PCR操作指南.docVIP

Bio-Rad iQ5 Real-Time qPCR操作指南 提前10分钟检查电脑和定量PCR仪是否连接好电源，并按顺序先后打开荧光检测器、PCR仪（开关从上到下）以及电脑。因为检测器光源打开后需要一段时间才能稳定，激发和检测效果才能理想。 把样本放入PCR仪样本盘，找到桌面Bio-Rad软件，双击打开。 编辑新的protocol：A，在protocol按键下，protocol详细设定会出现在下方视窗。B，在selected protocol视窗下，按下edit可以编辑自己的protocol。增减step或cycle。C，设定完成后按下saveedit protocol editing，在save as 的视窗下键入protocol的名称，然后按下save。D，以后若用相同的protocol，只要打开你保存的名称即可。 编辑新的plate A，按放入的样本顺序设定相应的位置。在视窗左上方的notes中你样本名称顺序以免忘记。B，在sample volume选择25；seal type选择flat cap；vessle type 选择tubes。C，系统会默认FAM，如果选择SYBR GREEN，请在视窗右中位置按下select/add fluorophores选择SYBR或根据实验要求选择SYBR1、2……。D，设定完成后按下saveedit plate editing，在save as 的视窗下键入plate的名称，然后按下save。 Begin a run：当plate及protocol设定完成后，到workshop模组下，按下右上方的Run，再按下begin run在save optical data file视窗下，输入的名称，按下ok便可运行程序。此时程序自动切换到monitor run视窗，可以即时检测反应的进行过程。 实验结束后，单击界面，提示是否保存结果，点击“是”，此时可以分析结果。 关机顺序：切记！先关Bio-Rad软件，再关PCR仪及荧光检测器。PCR仪，单独打开PCR仪电源后可以控制主机上的软键盘，可以用于普通PCR操作，当普通PCR实验结束后，切记先关闭程序后，再关电源。要不下次使用Real-Time qPCR时需要重新调试。 所有实验数据请用光盘刻录后带走，禁用U盘、MP4、移动硬盘等接触电脑主机USB接口。