中图版生物选修1第二节《 DNA片段的扩增——PCR技术 》word学案.docVIP

第二节 DNA片段的扩增——PCR技术 [课标要求] 1．理解PCR的原理，讨论PCR应用。 2．尝试PCR技术的基本操作。 [知识梳理] 一．背景知识 1． 细胞内DNA复制步骤： （1）在 作用下解开DNA双链 (2 ) 在 作用下，以DNA单链为模板，合成一段 ;（两条DNA模板链各需一个RNA引物） (3 ) 以RNA引物为起点，在 作用下，以 为原料，按照碱基互补配对原则合成两条新链。 2． 聚合酶链式反应(PCR)概念; 。 3． PCR过程与细胞内DNA复制过程区别： （1）引物是人工合成的 单链，２０－３０个脱氧核苷酸，而不是RNA。 (2) 解旋通过对反应 的控制来实现而不依靠 。[来源:学科网ZXXK][来源:Z#xx#k.Com] —— ——[来源:学*科*网Z*X*X*K] 72℃,7min 注：反应产物在4℃保存 4．检测扩增效果 （1）稀释样品10倍 （2）以H2O作对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计读数调到零。 （3）加入到厚度为1cm的比色杯中，测定260nm处的光吸收值 （4）DNA浓度（μg/mL）=（A260nm/0.02）×稀释倍数 三．探究活动 PCR实验虽然操作简单，但实验设备及药品价格较高，可以利用自己准备的简易材料，设计并进行PCR技术的模拟实验操作。 四．PCR技术意义 PCR能 ，从而有效地解决了因为样品中DNA含量 而难以对样品进行分析研究的难题，大大提高了对DNA分子的分析和检测能力，被广泛应用于 、基因序列分析、遗传病诊断，古生物学研究以及形侦破案、亲子鉴定等。 五．小知识： 1．DNA的两条链是反向平行的，为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA的羟基(-OH)末端称为5’端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3’端延伸DNA链。但DNA合成的方向是从子链的5’端向3’端延伸。 2．引物是一段RNA，它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。用于PCR的引物长度通常为20—30个核苷酸。 3．在80oC—100oC的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。 [复习指导] 本节课复习要注重细胞内DNA复制过程和体外DNA片段的扩增——PCR技术的过程，运用DNA复制过程原理相同的方法，明确体外DNA片段的扩增——PCR技术在基因克隆、基因序列分析、遗传病诊断，古生物学研究以及形侦破案、亲子鉴定等方面的地位和作用。如何在体外创设细胞内DNA复制的条件是PCR技术的关键，细胞内的各种条件实际上是利用PCR仪来模拟的。PCR仪原理复杂，操作简单。 [典例解析] 1.PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是（ ） ①PCR过程需要的引物是人工合成的DNA单链 ②PCR过程不需要DNA聚合酶 ③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的 ④PCR过程中，DNA不需要解旋，直接以双链DNA为模板进行复制 A． ①②③④ B． ①② C．①③ D．②④ [解析] PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同。第一，PCR过程需要的引物不是RNA，而是人工合成的DNA单链，其长度通常为20－30个脱氧核苷酸。第二，PCR过程中，DNA解旋不依赖解旋酶，而是通过对反映温度的控制来实现的。 [答案] C。 2．在PCR扩增前，需要将下列哪些物质加入微量离心管中？（ ） ①模板DNA ②模板RNA ③DNA解旋酶 ④耐高温的DNA聚合酶 ⑤引物 ⑥PCR缓冲液 ⑦ 脱氧核苷酸贮备液 ⑧ 核苷酸贮备液 A．①④⑤⑥⑦ B．①③④⑤⑥⑧ C．②③④⑤⑥⑦ D．①④⑥⑦⑧ [解析] 进行PCR过程前，将PCR缓冲液、DNA模板、一对引物、四种脱氧核苷酸、DNA聚合、Mg2+等成分加入到一种特制的微量离心管中。[来源:学|科|网] [来源:学_科_网]