免疫规划相关疾病血清学检测.ppt

免疫规划相关疾病血清学实验室检测 河北省疾病预防控制中心 免疫规划管理所 梁勇 免疫规划相关疾病血清学检测概述 1、乙肝表面抗原和乙肝表面抗体 2、麻疹IgG抗体和IgM抗体检测 3、风疹IgG抗体和IgM抗体检测 4、白喉和破伤风凝集抗体检测 5、百日咳凝集抗体和IgG抗体检测 6、其它还包括乙型脑炎IgG、流行性脑脊髓膜炎IgG、脊髓灰质炎三型抗体检测等 从检测类别上分类 1、免疫成功率检测 （初免儿童抗体水平检测） 2、人群抗体水平检测 （涉及到多个年龄组） 3、疾病和疫情的实验室（血清学）诊断 包括麻疹、风疹等发热岀疹性疾病诊断、白喉和破伤风以及百日咳的实验室诊断等。 初免和健康人群——检测样品的获得 1、一般情况下都应通过抽样获得被调查对象，然后，对调查对象采集静脉血。 2、常见的抽样方法： 单纯随机出样——抽签法和随机数字表法 系统抽样 整群抽样 分层抽样 多阶段抽样 常用的抽样方法 多阶段抽样 组群抽样 批质量保证抽样 接种率调查抽样方法——按容量比例概率抽样(PPS)与批质量检验抽样（LQAS）相结合的方法 特点：分层多阶段抽样；先抽乡级单位，再抽村级单位，最后再抽调查对象，采集血标本。 回避 1、随意确定一个乡或村； 2、在乡级接种门诊等候随便采血； 3、在村级由村医带领（随意）到几个家庭采血；； 4、到学校任意找一个班级或几个班级随意采集血； 5、以上这样做，既浪费资源，结果也无代表性。 制定采血调查表 按照调查目的制定采血登记表，一般采用过录表。有时使用个案表，如病例调查。 调查时，一定要注意被调查者信息的收集和保持完整。 有时为了达到某一目的，按照过去调查时掌握的情况，人为确定某些“好的”和“不好的”乡或村进行血清学调查。 血标本的采集 现一般多采用静脉采血，采血量一般3-5ml，能满足1.5-2.5ml的血清量，一个人份可以同时能满足检测多项指标的要求。同时，对于有重大意义的血清标本，还同时能够满足备份的要求。 尤其是对于2-5岁以下幼儿的采血，每个县级单位一定要有2-3名技术数量的人员，才能够保证血标本的采集。 采血时一定要制定编号规则，统一编号，血标本采集后及时标号。 血清标本的收集和保存 血标本采集后一定要及时分离血清，切不可长时间在常温下放置，否则可能会导致污染，废弃。 血标本采集后最好是放在室温凝集，及时离心后，分离出血清，血清标本-20℃保存。血标本采集后4 ℃保存可能要在一定程度上会降低抗体滴度。 如果需要过夜最好是放在4 ℃保存。 血清标本的收集和保存 1、血清标本尽量避免反复冻融，反复多次冻融也会降低抗体滴度； 2、必要时将分成几份分别保存，可避免反复冻存。 3、血清标本分离后，及时将血标本上的号码转移至血清标本上，避免号码混淆，并及时与采血单核对。 采血和血清收集用品 1、采血现多用一次性采血针（针连着管）和采血管（无菌）； 2、收集血清多用1.5ml尖底、旋盖、管体和旋盖带链接的离心管盛放血清。 3、当血清较多时，也可使用2-3ml冻存管。 血清学检测环境条件及设备 1、生物安全二级实验室。 2、仪器设备： 培养箱、冰箱、冰柜、酶标仪（405nm、450nm、490nm、650nm)、洗板机、加样器（移液器）。 3、加样器：单道和多道（8道和12道） 单道：1-10μl、1-20μl、5-50μl、5-200μl 多道：5-50μl、5-200μl等。 血清学检测的其它用品 1、振荡器、离心机、水浴箱、天平、高压锅 2、吸管、烧杯、量筒等 3、常用化学试剂 免疫监测及其评价 详见Word文档。 ELISA实验的质量控制 详见pdf文件。 乙肝表面抗原和乙肝表面抗体检测 1、国内多家试剂公司生产，灵敏度和特异度、重复性等指标各不相同。 2、国内多数公司生产的试剂大多是过关的，我们现多使用北京万泰生物药业股份有限公司生产的。 3、考察一家公司生产的试剂可以从灵敏度和特异度、重复性三个指标来考察。 4、制备自己的质控血清，以检查不同厂家、不同批次的试剂的稳定性和可用性。 乙肝表面抗原和乙肝表面抗体检测 1、结果影响因素 试剂稳定性； 取样和血清本身如融血、脂类成分、药物成分等； 操作者人为误差和误操作； 仪器设备稳定性； 不遵守操作规程，等 实验中影响结果最多见的就是血脂。 乙肝表面抗原和乙肝表面抗体检测 2、HBsAg阳性结果的对待 对于HBsAg阳性结果一定要谨慎； 检查血清（肉眼观察的）状态； 查看其HBsAb结果； 双份（孔）重复检测； 必要时更换试剂重复检测； 相隔一定时间再次采血双孔双项目重复检测。 麻疹IgG抗体检测 麻疹IgG抗体检测