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BDA皮质脊髓束神经顺行示踪在大鼠脊髓损伤模型中的应用,大鼠脊髓解剖图,大鼠脊髓,皮质脊髓束,皮质脊髓侧束,皮质脊髓束病变可产生,皮质纹状体脊髓变性,皮质脊髓前束,皮质脊髓束损伤,sd大鼠
中国试剂网 3.22.5
BDA 皮质脊髓束神经顺行示踪在大鼠脊髓损伤模型中的应用
1.麻醉后将头部同定于动物实验用立体定向架卜,切开有额顶头皮,用微型钻磨
去颅骨形成5ram 直径大小网形骨窗
2.在手术显微镜下剪开硬脑膜,用微量注射器将 10%BDA 溶液(美国 Molecular
Probes 公司产品)缓慢注入右侧的感觉运动区皮质(sensorimotor cortex) 内。注射时
将微量注射器同定在一 体定向支架上,选择无血管区作为注射点,每个注射点
分别在距皮层表面0 .5、1.0 和2 .0mm 处各注药一次,每次剂量0.5 微升 。
每次注射后针头滞留10min,然后缓慢进退针。每个动物接受10 个皮层注射点,
BDA 注射总量为2100 微升。
3.注射完毕后用薄层明胶海绵覆盖脑表面,缝合头皮。
4.2 周后再次麻醉动物,打开胸腔,用4 生理盐水和4 %多聚甲醛液行心脏灌注
后,取出大脑和脊髓组织,置于4 %多聚甲醛液中4~C 保存,待处理。
BDA 染色显影:
1.分别取大脑和各段脊髓组织,脊髓分别取上颈段(C ),胸段(Ts 嘏) ,腰段(L . ) ,
用冰冻切片机连续切片,组织切片厚度为40 m 。
2.采用自由漂乳法将组织切片先后在以下溶液中孵化:
含 0 .1 %H2O2 的甲醇溶液 10min 、含 0 .5 %Triton x—IOOPBS 溶液
(PBS—T)30min,抗生物素蛋白一生物素一
过氧化物酶复合液(avi(1inIbi0tin—per0xidase,美国 Vector Laboratories 公司产
品)lh ;用PBS-T 液冲洗组织切片两次,每次各10min,最后在二氨基联苯胺(Vector
laboratories 公司产品) 中显影5rain 。
3.上玻片、风干、脱水及盖玻片覆盖。
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