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BDA皮质脊髓束神经顺行示踪在大鼠脊髓损伤模型中的应用.pdf

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中国试剂网 3.22.5 BDA 皮质脊髓束神经顺行示踪在大鼠脊髓损伤模型中的应用 1.麻醉后将头部同定于动物实验用立体定向架卜,切开有额顶头皮,用微型钻磨 去颅骨形成5ram 直径大小网形骨窗 2.在手术显微镜下剪开硬脑膜,用微量注射器将 10%BDA 溶液(美国 Molecular Probes 公司产品)缓慢注入右侧的感觉运动区皮质(sensorimotor cortex) 内。注射时 将微量注射器同定在一 体定向支架上,选择无血管区作为注射点,每个注射点 分别在距皮层表面0 .5、1.0 和2 .0mm 处各注药一次,每次剂量0.5 微升 。 每次注射后针头滞留10min,然后缓慢进退针。每个动物接受10 个皮层注射点, BDA 注射总量为2100 微升。 3.注射完毕后用薄层明胶海绵覆盖脑表面,缝合头皮。 4.2 周后再次麻醉动物,打开胸腔,用4 生理盐水和4 %多聚甲醛液行心脏灌注 后,取出大脑和脊髓组织,置于4 %多聚甲醛液中4~C 保存,待处理。 BDA 染色显影: 1.分别取大脑和各段脊髓组织,脊髓分别取上颈段(C ),胸段(Ts 嘏) ,腰段(L . ) , 用冰冻切片机连续切片,组织切片厚度为40 m 。 2.采用自由漂乳法将组织切片先后在以下溶液中孵化: 含 0 .1 %H2O2 的甲醇溶液 10min 、含 0 .5 %Triton x—IOOPBS 溶液 (PBS—T)30min,抗生物素蛋白一生物素一 过氧化物酶复合液(avi(1inIbi0tin—per0xidase,美国 Vector Laboratories 公司产 品)lh ;用PBS-T 液冲洗组织切片两次,每次各10min,最后在二氨基联苯胺(Vector laboratories 公司产品) 中显影5rain 。 3.上玻片、风干、脱水及盖玻片覆盖。

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