植物解剖与制片技术.docVIP

植物解剖与制片技术 ——石蜡切片法 一、实验目的 通过对材料的固定、脱水透明、浸蜡、包埋、切片等实验操作，了解石蜡切片的基本过程，掌握石蜡切片的制作方法。 二、实验原理 石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。优点：比较省时间易操作，可切成极薄的切片能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存缺点是只能用于较小组织块，较大组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆制片时间太长。1∕2二甲苯+1∕2酒精，2小时；二甲苯）——低温渗蜡（1∕2二甲苯+1∕2蜡，40℃，过夜）。 步骤二： 低温渗蜡——高温渗蜡（58℃，纯蜡，每隔2小时换蜡一次，不超过6小时）——包埋（一个蜡船放3—4个材料）1∕2二甲苯+1∕2酒精—100%酒精—85%酒精；每步10分钟）——染色（70%配制的番红，过夜）。 步骤五： 番红——85%酒精5分钟——染色（95%的酒精配制的固绿染液，1分钟）——95%酒精——100%酒精——100%酒精——二甲苯Ⅰ——二甲苯Ⅱ（每步5分钟）——封片（标记）——烘烤。 五、观察与照相 油莎豆为单子叶植物，在根部分蘖，所以没有茎，取其叶片，根部叶片，根做石蜡切片结果如下： 叶片： 图Ⅰ上部叶横剖面图 图Ⅱ上部叶叶脉维管束图 图Ⅲ 基部叶横剖面图 图Ⅳ 基部叶维管束图 （2）根： 图Ⅴ 根横剖面图 图Ⅵ 根中柱鞘横剖面图 六、结果分析与讨论 1、叶片： 表皮 细胞一层，排列紧密，表皮中应用成对的保卫细胞和副卫细胞。 叶肉 无栅栏组织和海绵组织之分，细胞比较均一，但从图Ⅰ看出上部叶肉组织细胞大且排列紧密，下部叶肉组织排列较疏松，且细胞富含叶绿体；但基部叶由于包在土中颜色为白色，如图Ⅲ，上下部叶肉组织差别不大，细胞中叶绿素较少。 叶脉 为典型的单子叶植物有限维管束（图Ⅱ、图Ⅳ），且木质部位于近轴面，韧皮部位于远轴面。维管束外有两层维管束鞘，外层细胞较大，壁薄，含有叶绿体；内层细胞小，壁厚。维管束的上下两侧具有厚壁细胞，一直延伸到表皮下，厚壁细胞对维管束具有支持作用。 而且上部叶与基本叶相比，含有大量的维管束，在上部叶肉细胞中叶脉分大、中、小三部分而且排列紧密；基部叶只有主脉和次脉之分，排列疏松。上部叶中机械组织远比基部叶发达。 2、根： 采集材料时，油莎豆已属于成熟期，所以根为老根，根毛已基本脱落。 表皮 根的最外层细胞，排列整齐，多已枯萎，根毛已脱落。 皮层 外皮层细胞一层，细胞小，排列整齐。由于根为老根，外皮层细胞壁增厚，部分已木质化。内皮层细胞有凯氏带加厚，对着初生木质部的内皮层细胞为通道细胞。 维管柱 由中柱鞘、木质部和韧皮部组成。中柱鞘紧贴内皮层，图Ⅳ和图Ⅴ中显示中柱鞘已被染成红色，说明在老根中中柱鞘已全部木质化。木质部与韧皮部相间排列，木质部脊数较多，为多原型。维管柱中央为薄壁细胞组成的髓。 七、注意事项 1. 取材2. 固定用适当的化学药液——固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。固定能使组织硬化，有利于切片的进行，而且也有媒浸作用，有利于组织着色。固定液的用量通常为材料块的20倍左右，固定时间则根据材料块的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定，可以从1小时至数天，通常为数小时至24小时。3. 脱水固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。固定后或洗涤后的组织内充满水分，如不除去水分就无法进行以后的透明、浸蜡与包埋，因为透明剂多数是苯类，苯类和石蜡均不能与水相融合，水分不脱尽，苯类不能浸入。酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行，通常从30％或50％酒精开始，经70％、85％、95％直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1～数小时，如不能及时进行各级脱水，材料可以放在70％酒精中保存，因高浓度酒精易使组织收缩硬化，不宜处理过久。4. 透明纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的媒浸液，替换出组织内的酒精。材料块在这类媒浸液中浸渍，出现透明状态，此液即称透明剂，透明剂浸渍过程称透明。常用的透明剂有二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等，各种透明剂均是石蜡的溶剂。通常组织先经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1～2小时，再转入纯透明剂中浸渍。透明剂的