结核分枝杆菌CFP-10蛋白的克隆及表达.pdfVIP

1材料和方法 1．1 菌种和载体 南省农垦总医院保存、提供。 1．2试剂 IPTG、硫酸卡那霉素(Kan)购自上海生工生物工程技术服务有限公司。DNA聚合 酶、T4DNA连接酶、限制性内切酶和DNA 购自北京百泰克生物技术有限公司。普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒购自北京天根生物科技有限公 司。6×His-tagged 公司产品，其他试剂均为国产分析纯试剂。 1．3引物 I和HindIIl。引 物由金斯瑞生物科技有限公司合成。 1．4 CFP一10基因的扩增与克隆 扩增产物经纯化试剂盒处理后，经双酶切，酶切后扩增产物经切胶回收与同样方式处理的表达质粒 DNA连接酶作用下连接，连接产物转化人大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，挑选 pET30a在T4 阳性重组子送南京金斯瑞生物工程有限公司测序。 1．5目的蛋白的诱导表达 将通过测序验证正确的重组子接种于含50 mg／L卡那霉素的LB液 终浓度为1mmol／L，继续370C振荡培养，从开始诱导表达lh起每隔lh留样