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§22-1 概述 高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种分离分析技术，随着不断改进与发展，目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。 高压：150-350*105 Pa 高效：大于30000塔板/米 高灵敏：10-9g （紫外检测）、10-11g （荧光检测） 3．操作条件差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小） §22-2 高效液相色谱仪 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 4．检测系统 在液相色谱中，有两种基本类型的检测器。一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等。另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光，电导检测器等。现将常用的检测器介绍如下: b. 光电二极管阵列检测器 c. 示差折光检测器（differential refractive index detector） 示差折光检测器 d. 荧光检测器（fluorescence detector） 预柱（保护柱）： 安装在进样器和分析柱之间，填充有与分析柱相同的固定相 作用：防止来自样品的不溶性颗粒物进入分析柱而造成污染；将强保留组分截流在预柱上，避免进入分析柱而造成污染。 3）传质阻抗项及其影响 1. 固定相与装柱方法的选择： 选粒径小的、分布均匀的球形固定相 （dp≤10μm） 首选化学键合相，匀浆法装柱 2. 流动相及其流速的选择： 选粘度小、低流速的流动相——甲醇， 流速约1ml/min 3. 柱温的选择： 选室温250C左右 1．分离机制：利用组分在两相中分配系数的差异实现分离。 2． 固定相：1）. 载体+固定液（物理或机械涂渍法） 缺点：系统内部压力大，固定液易流失，不实用 固定液——极性 固定液——非极性 2）. 化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体） 表面的游离羟基上。 如C18（十八烷基硅烷）、 C8（辛烷基）、氨基键合硅胶 正相色谱（NPLC）: 固定相极性 流动相极性 极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱 适合于分离极性化合物 反相色谱（RPLC）: 固定相极性 流动相极性 极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱 适合于分离弱极性化合物 分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异。 应用：适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；如农药异构体分离，石油中烷、烯、芳烃的分离。 缺点：容易产生不对称峰和拖尾现象。 三、 离子交换色谱（IEC） 四、 离子色谱（IC）  离子色谱的应用 五、 离子对色谱（IPC） 六、 尺寸排阻色谱（SEC） 七、 亲和色谱(AC) §22-5 高效液相色谱法的固定相 色谱柱是高效液相色谱的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分，其中的固定相是保证色谱柱高柱效和高分离度的关键。 高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大类。刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.O×108～1.O×109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官能团，就是键合固定相，可扩大应用范围，它是目前最广泛使用的一种固定相。硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5×108Pa。固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相两类。 三、凝胶 含有大量液体（一般是水）的柔软而富有弹性的物质， 一种经过交联而具有立体网状结构的多聚体。 软质凝胶：葡萄糖、琼脂糖等凝胶 耐压性差 半硬质凝胶：中等交联度的聚苯乙烯等 硬质凝胶：多孔硅胶、多孔玻璃等 四、离子交换剂 分类 按固定相制作方法： 多孔型离子交换树脂 薄膜型离子交换树脂 表面多孔型离子交换树脂 离子交换键合固定相 按离子交换剂类型： 强阳离子交换剂 以磺酸基为代表（-SO3-) 强阴离子交换剂 以季胺基为代表 (-NR3+) 弱阳离子交换剂 以羧酸基为代表 (-COO-) 弱阴离子交换剂 以二乙基氨基为代表(-CH2N(C2H5)2H+) 一、分离方法的选择