04 实验四 植物DNA的提取及纯度浓度鉴定.pptVIP

植物DNA的提取与鉴定 实验四 实验原理 真核生物DNA与蛋白质结合，以核蛋白的形式存在于细胞核内 在提取DNA时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，释放出核蛋白 实验原理 ①在核蛋白溶液加入氯仿－异戊醇，振荡，使蛋白质乳化变性，再离心除去变性蛋白质。 ②用十二烷基硫酸钠（SDS）等去污剂使蛋白质变性，与核酸分离，从材料中提取出DNA。 ③用苯酚处理，然后离心分层，蛋白变性后则停留在酚层内。 ① 化学因素 核酸在pH4.0～11.0稳定， 否则就变性降解。 ② 物理因素 DNA是长链线状分子，强机械作用会使DNA分子断裂。 ③ 酶的作用 DNA酶会降解DNA分子。 紫外光吸收法鉴定DNA纯度和浓度 核酸的紫外吸收峰260nm,蛋白质280nm DNA的A260/A280约1.8，RNA的约2.0 1ug/mL的DNA溶液,吸光度A260=0.020 1ug/mL的RNA溶液，A260=0.022-0.024 1.0个A260相当于50ug/mL的DNA,40ug/mL的RNA。 实验步骤 10mL CTAB分离缓冲液加入50mL 离心管中，在65℃水浴中预热。 取剪碎的植物叶片适量，置于预冷的研钵中，倒入液氮，尽快将叶片研碎。 将约1g叶片粉末加入预热的CTAB分离缓冲液中，轻轻转动混匀，65℃保温30分钟。 加10m