抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备与鉴定.pdfVIP

江苏农业科学2012年第40卷第1期 一43一 左伟勇，洪伟鸣，吴双，等．抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备与鉴定[J]．江苏农业科学，2012，40(1)：43—45 抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备与鉴定 左伟勇，洪伟鸣，吴双，王安平，朱善元 (江苏畜牧兽医职业技术学院／江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室，江苏泰州225300) (5D7)。抗体的亚类为IgGl，通过竞争阻断试验证明其具有良好的特异性和敏感性，利用Protein—Gsepharose亲和层 ng／mL。 析系统纯化单克隆抗体5D7，单克隆抗体5D7对cL的Ic，。约为4．6 关键词：盐酸克伦特罗；单克隆抗体；制备与鉴定；间接竞争ELIsA 中图分类号：s852．4+3文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2012)0l—0043—03 盐酸克伦特罗(clenbuterol hydmchloride，cL)是一种HT培养基：每100mL的基础培养基10％DMEM(无抗生素) 卢一肾上腺素受体激动剂，因具有营养再分配、促进蛋白质合 加50×HT贮存液1 成、增加动物酮体瘦肉率、提高饲料转化率的作用，常被非法 mL。 基10％DMEM(无抗生素)加50×HAT贮存液2 1．3．2 O．01fIloL／L 作为饲料添加剂用于畜产品的生产，但其在畜产品体内的残 EusA相关溶液的配制 PBs(pH值 8．O 2．9 0．2 留对人类健康存在潜在的危害，虽然被禁止用于畜产品生产 7．4)：NaCl g，Na2HP04·12H20g，KH2P04g，KCl 0．2 000 moL／L 中，但是违法添加甚至造成消费者中毒的事件屡见不鲜¨]。 g超纯水配制成1 mL。0．01 PBST(pH值 本研究通过研制针对CL的单克隆抗体‘2“1，初步建立了检测 000mLO．olmoL／L 7．4)：每1 cL的间接竞争酶联免疫吸附法(ciEusA)，在cL残留的快Tween一20。0．05 速筛检中具有良好的特异性和敏感性，为后续针对cL检测 1．59 2．97 9．5)：Na2c03g，NaHc03g，超纯水配制成 1 000 m彤L 的EusA试剂盒的开发和胶体金试纸条的制备提供了良好 mL。终止液(2 H：s0。)：浓硫酸22．2mL、超纯水 的抗体材料。 177．8mL。 1材料 2方法 1．1供试动物与细胞系 2．1动物免疫 6～8周龄的BALB／c小鼠和ICR小鼠购自扬州大学比 采取长期小剂量刺激的原则对6～8周龄BALB／c小鼠 较医学中心，小鼠骨髓瘤细胞sP2／o为笔者所在实验室保存。进行免疫，免疫方法见表1。 1．2试剂 辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG、PEGl450、50×HT、