生化实验二蛋白质测定.ppt

实验二 人血清蛋白质含量测定 蛋白质测定的主要方法 根据蛋白质元素组成——凯氏定氮法； 根据蛋白质组成特点建立的比色法——双缩脲法，lowry改良法，考马斯亮蓝染色法，BCA法； 根据蛋白质的吸收特性建立的紫外分光光度法； 蛋白质的紫外吸收 双缩脲法测定蛋白质 判断测定误差，确定方法的可靠性。 大批样品分析时，可省略多次计算，直接获得样品测定结果。 绘制曲线注意点： 1.横轴与纵轴比例 2.各坐标点应与原点连成一条直线 3.直线通过尽可能多的点，不在直线上的点均量分布在直线两边 实验步骤 实验结果的计算 * 蛋白质分子中含有共轭双键的芳香族氨基酸。它们具有吸收紫外光的性质。 其最高吸收峰在280nm波长处，且在此波长内吸收峰的光密度值与其浓度成正比。 Tyr Trp 实验原理——双缩脲反应 180oC 双缩脲在碱性条件下可与铜结合成紫红色复合物 Cu2+ OH- 蛋白质具有双缩脲结构，在碱性条件下也能与铜结合成紫红色复合物在一定的范围内，颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比——1-10mg，因此通过比色法可以测定蛋白质含量。 标准曲线的作用和绘制 根据Lambert-Beer定律，A与C成正比 配制一系列标准液 C1、C2、C3??， 在?max下，测相应的A1、A2、A3……。 Ax Cx 1 2 3 4 5 6 7 标 准 管 测定管 空白管 试剂 蛋白质标准液（ml） 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蛋白质测定液（ml） 1.0 0.9%NaCL （ml） 0.8 0.6 0.4 0.2 1.0 双缩尿试剂 （ml） 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 37oC水温育20分钟，540nm比色，测定吸光值 双缩尿法测定蛋白质浓度 1 2 3 4 5 6 7 A 实验数据 *