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内容安排: 绪论和组织培养基本知识 组织培养基本技术 培养细胞、组织的检测方法 组织培养应用简介 第一部分 绪论和基本知识 第一章 绪论 2、原代培养：初代培养，直接从机体取出的细胞或 组织进行培养的过程。 3．继代培养：传代培养，从原代培养的细胞继续转接 培养称继代培养。 4、细胞株：从原代培养物或细胞系中获得具有特殊 性质或标志物的培养物称为细胞株。 5、细胞系：原代培养物经首次传代成功后即称细胞系， 其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系 或无限细胞系，不能连续培养的称为有限 细胞系。大多数二倍体细胞为有限细胞系。 （二）动物细胞体外培养特点 动物细胞生长缓慢，培养时间长。 更易受微生物污染（包括细菌、真菌、病毒、支原体），需要防治污染问题。 对培养环境的适应性差，对环境极其敏感。包括PH值、温度等。 对营养要求高，除了氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外，一般还需要血清。 原代细胞一般繁殖50代左右退化死亡。 总之，动物细胞培养对各方面的要求更高，培养难度更大。 （三）动物细胞培养的发展历史 1885年，Wilhelm Roux （劳斯，德国）最先尝试离体培养鸡胚神经在温热的盐水中维持若干天，首次采用了“组织培养”一词。 1907年，美国胚胎学家Ross Harrison （哈里森）将蛙胚神经管区的一片组织移植到蛙的淋巴液凝块中，这些细胞不但存活若干周，且细胞长出了轴突（盖玻片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法）。他被公认为动物组织培养的开山鼻祖。 1912年,法国学者Alexis Carrel（卡雷尔）采用鸡胚匀浆组织液与血浆混合使用，培养了各种动物组织的组织块。在技术方面，卡雷尔把无菌操作技术引入组织培养中。 1913年，Steinhardt建立了单盖片悬滴培养法。 1925年，Maximow采用双盖片法。 1934年，Gey和Lewis 用旋转管培养了许多细胞系。相继，人们设计了多种类型的培养瓶。 1948年，Sanford创立了单层细胞培养法，建立了各种细胞系。他还创建了单个细胞培养方法。 1951年，Pomerat设计了细胞培养灌流小室技术，使细胞生活在不断更新的培养液环境中，便于做细胞显微摄影和代谢等研究 1951年， 厄尔 （Earle） 发明了体外培养动物细胞的人工合成培养基。 1952年．Gey建立了第一个人体细胞系，人体宫颈癌Hela细胞系。 1960年，Barski等人在两种不同类型的细胞混合培养物中发现有自发的融合细胞。 1962年，冈田善雄又发现了已灭活的仙台病毒可以诱发体内艾氏腹水瘤细胞和非恶性细胞融合。且融合细胞染色体丢失，恶性特征受到抑制。 主要优点： 1、直接观察活细胞形态、结构和生命活动； 2、研究细胞种类多，从低等到高等，从人类、胚胎到 成体、正常组织到肿瘤； 3、便于使用各种技术：荧光、电镜、组化、同位素标记 等观察和研究细胞、组织生长、代谢状况； 4、能同时提供大量性状相似的实验对象，耗资少较经济； 5、成为基因工程等的材料来源。 《Cell》：美国，创刊于1976年，现已成为世界生命科学研究领域最著名的期刊之一。 《Science》：美国的《Science》是国际著名的自然科学综合类学术期刊 《Nature》：英国，兼顾学术期刊和科学杂志，即科学论文具较高的新闻性和广泛的读者群。 《Journal of Cell Biology》 第二章 培养细胞的生物学特性 上皮型细胞 特点：形态类似血管内皮细胞，在培养器皿支持物上生长 具有扁平状，不规则。 来源：来源于外胚层、内胚层细胞。如：皮肤表皮角质细 胞，消化管上皮，肺泡上皮等细胞。 形态：贴壁后呈不规则多角形，中央有扁圆形核，细胞彼此紧密相连成单层细胞，呈现“铺路石状”。 生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。 成纤维型细胞 名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的 来源：由中胚层间充质组织起源的组织，如： 真正的成纤维细胞，如人胚肺细胞等。 形态：长梭形，细胞在支持物表面 呈梭形或不规则三角形生长， 细胞核位于中央，胞质向外 伸出2-3个长短不同的突起 生长时呈放射状、漩涡状走向，细胞间间隙 较大。 其生长特点为： 细胞一般并不 紧靠相连； 体外培养时，所谓的上皮细胞型细胞或成纤维细胞型细胞，仅是因为其形态与体内的上皮细胞或成纤维细胞类似，并不能将体外培养的这些细胞与体内同名的细胞完全等同；而且，这种